聚己內酯靜電紡絲血管支架活性修飾及生物功能評價研究.pdf

1、盡管大口徑血管移植物已經可應用于臨床治療，但理想的小口徑血管移植物仍需進一步研究。小口徑血管由于其流速慢、剪切力低等原因易形成血栓，同時手術吻合部位易發(fā)生內膜增生，造成手術失敗。本文的研究工作主要圍繞對聚己內酯(Poly(ε-caprolactone)，PCL）電紡絲材料的修飾改性展開，分為三個部分：
　　 (1)通過卵磷脂與PCL混紡的方法對材料進行修飾，改善材料的親水性、生物相容性和細胞相容性。
　　 (2)通過真菌

2、中表達純化的Ⅱ型疏水蛋白HFBI對PCL電紡絲材料表面進行涂層處理，改善PCL的親水性。進而利用疏水蛋白與抗體的蛋白間相互作用對抗體進行固定，利用抗體與人臍靜脈內皮細胞表面受體的結合能力提高內皮細胞在材料上特異性黏附。
　　 (3)通過乙二胺氨解材料，使PCL產生氨基。利用1-乙基-（3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺/N-羥基丁二酰亞胺(EDC/NHS)的嗎啉乙磺酸( MES)緩沖體系，將肝素共價結合到氨基化的PCL材料上，然后通過

3、肝素與生長因子的結合域固定血管內皮細胞生長因子(VEGF)。進而利用VEGF與內皮細胞表面的VEGF受體的特異性結合促進支架材料的快速內皮化，同時利用肝素（Heparin，Hep）的抗凝血功能改善材料的血液相容性。
　　 本研究利用多種實驗方法對材料進行了評價。采用掃描電鏡(SEM)觀察材料微觀結構的變化；采用激光共聚焦來觀察材料對抗CD31抗體和VEGF的結合能力；采用細胞黏附實驗和細胞增殖實驗來評價材料的細胞相容性；使用動靜

4、脈分流實驗來評價材料的血液相容性；采用大鼠皮下埋植實驗觀察材料的炎癥反應等。
　　 實驗結果如下：
　　 (1)卵磷脂復合的電紡絲PCL材料的親水性得到了極大的改善，純PCL材料的靜態(tài)水接觸角為94.5±1.5度，而水滴可在加入卵磷脂混紡后的材料表面完全鋪展并在30秒內被材料完全吸收?；旒彶牧系募毎H和性顯著高于純PCL材料，可促進骨髓間充質干細胞(MSCs)在材料表面的增殖?；旒彶牧系募t細胞溶血率顯著低于純PCL材料，

5、表現出良好的血液相容性。
　　 (2)疏水蛋白HFBI修飾的PCL材料的靜態(tài)水接觸角為60.9±0.8度，顯著低于PCL對照組的104.2±1.5度，證明了疏水蛋白自組裝膜結構對PCL材料親水性的改善。修飾后的HFBI-PCL材料能高效結合抗CD31抗體，促進內皮細胞在材料上的特異性黏附。
　　 (3)SEM觀察及力學拉伸實驗表明，化學處理沒有對材料的納米纖維結構及其力學強度產生顯著影響。通過激光共聚焦觀察到VEGF較好

6、地分布在纖維表面?；罨糠帜蠲笗r間實驗(APTT)表明帶有肝素的材料凝血時間顯著增長，凝血時間從20.87±0.73s增加到84.6±2.23s，但結合VEGF后凝血時間又下降到45.45±1.03s。說明部分肝素被結合的VEGF屏蔽。動靜脈分流實驗( AV-shunt)表明，帶有肝素的材料有較好的抗凝血效果。體外細胞實驗表明，材料表面固定的VEGF可促進入臍靜脈內皮細胞(HUVEC)的黏附和增殖，體內實驗觀察到結合了VEGF的材料