聚己內(nèi)酯囊管化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞活性研究.pdf

1、目的: 分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞為研究對(duì)象，建立囊管化細(xì)胞的回收方法和囊管化細(xì)胞活性測(cè)定方法，研究聚己內(nèi)酯半透膜囊管化對(duì)細(xì)胞活性的影響，探討半透膜影響細(xì)胞活性的機(jī)制，為聚己內(nèi)酯半透膜免疫隔離移植技術(shù)的進(jìn)一步研究和應(yīng)用提供依據(jù)。 方法: 分離、純化和培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，第三代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)研究。細(xì)胞懸液置聚己內(nèi)酯半透膜管內(nèi)，半透膜管兩端70℃熱夾閉封裝，細(xì)胞貼壁后0．25％胰酶消化回收細(xì)胞，測(cè)定不同消化時(shí)間對(duì)細(xì)胞活性和

2、回收率的影響。以添加10％胎牛血清的完全培養(yǎng)液平皿法細(xì)胞培養(yǎng)為對(duì)照組，設(shè)置3個(gè)實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行聚己內(nèi)酯囊管化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)活性研究。 實(shí)驗(yàn)組1：細(xì)胞以完全培養(yǎng)液懸浮后封裝，完全培養(yǎng)液培養(yǎng)，小分子營養(yǎng)物質(zhì)能夠通過滲透有效補(bǔ)充； 實(shí)驗(yàn)組2：細(xì)胞以完全培養(yǎng)液懸浮后封裝，不含血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)液培養(yǎng)，血清小分子活性物質(zhì)不能有效補(bǔ)充； 實(shí)驗(yàn)組3：細(xì)胞以基礎(chǔ)培養(yǎng)液懸浮后封裝，完全培養(yǎng)液培養(yǎng)，小分子營養(yǎng)物質(zhì)能夠通過滲透補(bǔ)充，但細(xì)胞

3、缺乏血清大分子的營養(yǎng)。 囊管內(nèi)細(xì)胞胰酶消化回收，以細(xì)胞計(jì)數(shù)、MTT法、CCK-8法測(cè)定細(xì)胞的活性，并進(jìn)行生長曲線分析。以完全培養(yǎng)液平皿法細(xì)胞培養(yǎng)為對(duì)照組，設(shè)2個(gè)實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行聚己內(nèi)酯囊管化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植細(xì)胞活性研究。兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別以完全培養(yǎng)液和基礎(chǔ)培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞后封裝移植，囊管內(nèi)細(xì)胞回收后以細(xì)胞計(jì)數(shù)、MTT法、CCK 8法測(cè)定細(xì)胞的活性，共8天，進(jìn)行生長曲線分析。 結(jié)果: 分離培養(yǎng)得到典型的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，細(xì)胞活

4、性良好。70℃熱封裝及采用O．25％胰酶消化3分鐘對(duì)細(xì)胞無明顯損傷，活細(xì)胞超過95％，細(xì)胞回收率不低于97％的。完全培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞封裝，以完全培養(yǎng)液培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成活良好，細(xì)胞增殖率達(dá)到150％，低于對(duì)照組的210％。完全培養(yǎng)液懸浮封裝，基礎(chǔ)培養(yǎng)液培養(yǎng)，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞活性迅速下降，一周之內(nèi)全部死亡；基礎(chǔ)培養(yǎng)液懸浮封裝，以完全培養(yǎng)液培養(yǎng)，骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞活性下降，2 3天后逐漸上升，細(xì)胞增殖率低于10％，3個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均具有

5、顯著性差異。異體移植實(shí)驗(yàn)中，完全培養(yǎng)液懸浮和封裝后移植的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖率約為140％；較對(duì)照組200％為低，基礎(chǔ)培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞封裝后細(xì)胞活性下降，其后逐漸上升，但增殖率低于10％，2個(gè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組均具有顯著性差異。 結(jié)論: 建立了囊管化細(xì)胞的回收方法和以細(xì)胞回收為基礎(chǔ)的囊管化細(xì)胞活性測(cè)定方法，發(fā)現(xiàn)囊管化封裝對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)與細(xì)胞移植均有一定的的抑制作用。血清中小分子活性物質(zhì)對(duì)細(xì)胞具有重要的意義，是細(xì)胞存活和生長的關(guān)鍵。血清中大