文冠果殼苷抗阿爾茨海默病的炎癥相關機制研究.pdf

1、目的:文冠果殼苷是一種從文冠果果殼中提取出的三萜皂苷類化合物，前期研究證實其對多種癡呆模型動物的學習記憶障礙具有改善作用。為進一步探討文冠果殼苷對阿爾茨海默病(AD)防治作用及作用機制，本文依據(jù)AD的炎癥假說，從整體水平及細胞分子水平考查了文冠果殼苷對β-淀粉樣蛋白(Aβ)致AD模型的改善作用及炎癥相關機制。
　　方法:①以β淀粉樣蛋白25-35肽段(Aβ25-35)/γ-干擾素（IFN-γ）誘導小膠質細胞活化后，考察文冠果殼苷對

2、Aβ25-35/IFN-γ激活的小膠質細胞NO釋放量的影響;通過ELISA實驗檢測IL-1β及TNF-α的含量;采用westernblot方法檢測iNOS、COX-2、NF-κB及MAPK通路相關蛋白表達的情況;采用免疫熒光方法檢測NF-κBP65的核轉移情況;采用RT-PCR方法檢測IL-1β、TNF-α、iNOS、COX-2及TLR2mRNA表達的情況;通過MTT法考察小膠質細胞條件培養(yǎng)液對SH-SY5Y神經(jīng)元生存率的影響。②側腦室

3、注射Aβ1-42制備癡呆小鼠模型，通過Y迷宮、Morris水迷宮實驗考察文冠果殼苷對模型小鼠學習記憶障礙的影響;通過免疫組織化學方法考察了小鼠海馬及皮層區(qū)CD11b的表達情況;利用ELISA方法考察了小鼠海馬組織中IL-6及IL-4表達情況;利用westernblot方法考察了小鼠海馬組織中iNOS、COX-2、NF-κB及MAPK通路相關蛋白表達的情況;利用RT-PCR方法考察了小鼠海馬組織中iNOS、COX-2及TLR2mRNA表達

4、的情況。
　　結果:①文冠果殼苷可顯著降低Aβ25-35/IFN-γ誘導的N9細胞及原代小膠質細胞培養(yǎng)液中NO、TNF-α、IL-1β的含量，抑制iNOS及COX-2蛋白的表達，抑制TNF-α、IL-1β、iNOS、COX-2及TLR2mRNA表達;顯著抑制NF-κB、MAPK蛋白的激活及NF-κBP65的核轉移，抑制活化的小膠質細胞條件培養(yǎng)液引起的SH-SY5Y神經(jīng)元的死亡。②文冠果殼苷(0.08～0.32mg/kg)顯著提高側

5、腦室注射Aβ1-42致癡呆模型小鼠Y迷宮實驗中小鼠自發(fā)交替反應率;顯著縮短水迷宮實驗中小鼠到達安全臺的逃避潛伏期及游泳路程，并顯著增加小鼠在原安全臺所在象限游泳時間和游泳路程百分比;文冠果殼苷可顯著抑制模型小鼠海馬促炎癥因子IL-6含量的增加及炎癥抑制因子IL-4含量的減少;抑制大腦皮層及海馬CD11b蛋白的表達;Westernblot結果顯示，文冠果殼苷可顯著降低iNOS、COX-2蛋白的表達;抑制NF-κB及MAPK蛋白的激活;RT

6、-PCR結果顯示，文冠果殼苷可顯著抑制iNOS、COX-2及TLR2mRNA表達。
　　結論:文冠果殼苷下調小膠質細胞TLR2，抑制IKK表達、IκB蛋白的降解及NF-κBp50和p65亞單位的核轉錄，抑制MAPKs信號轉導通路，進而抑制炎癥因子釋放的作用可能與其神經(jīng)元保護作用及對側腦室注射Aβ1-42致癡呆模型小鼠的學習記憶障礙改善作用有關。本研究及前期試驗結果提示，文冠果殼苷具有顯著的改善學習記憶障礙及神經(jīng)保護作用，作為AD防