Macelignan對(duì)阿爾茨海默病作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimet’s disease，簡(jiǎn)稱AD)是病因未明的原發(fā)性神經(jīng)退行性疾病(neurodegenerative disease)，可以導(dǎo)致學(xué)習(xí)和記憶力的下降。Macelignan為從印度尼西亞的植物Myristica fragrans Houtt(Myristicaceae)提取的天然的、無(wú)毒副作用的單體成分。傳統(tǒng)上，Myristica fragrans Houtt用于食物佐料和治療齲齒等牙病上。本研究為了探討Ma

2、celignan對(duì)阿爾茨海默病的作用機(jī)制，采用分子生物學(xué)技術(shù)、神經(jīng)行為學(xué)和免疫組織化學(xué)方法，為天然藥物Macelignan的開發(fā)和應(yīng)用提供了有效的實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。 本實(shí)驗(yàn)在體外運(yùn)用Western blot技術(shù)檢測(cè)了脂多糖和Macelignan對(duì)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)、環(huán)氧合酶2(COX-2)、磷酸化的p38、p38、cAMP應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(CREB)、核轉(zhuǎn)錄因子kB p65(NF-kB p65)等蛋白表達(dá)的影響，探討其

3、神經(jīng)炎癥病變的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)途徑和Macelignan在谷氨酸的細(xì)胞毒性作用下的神經(jīng)保護(hù)作用。在體外實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，動(dòng)物第四腦室內(nèi)注入脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)制備老年癡呆動(dòng)物模型，術(shù)后給予MaceIignan(10mg/kg/日)灌胃，利用Morris水迷宮測(cè)試方法檢測(cè)了脂多糖和Macelignan對(duì)Fischer-344大鼠空間學(xué)習(xí)記憶的影響，并運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)所制備的動(dòng)物模型的腦病理變化。

4、本研究的主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1．各濃度組Macelignan處理神經(jīng)小膠質(zhì)細(xì)胞BV2細(xì)胞后，利用WST-8試劑盒檢測(cè)了其細(xì)胞生存率變化，與對(duì)照組之間無(wú)顯著性差異。 2．倒置顯微鏡觀察結(jié)果表明，用5μg/ml谷氨酸處理的BV2細(xì)胞發(fā)生腫脹，細(xì)胞間接觸稀疏，增殖減慢，細(xì)胞周圍碎片增多。而Macelignan一谷氨酸復(fù)合處理組細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，細(xì)胞間結(jié)構(gòu)緊密，與對(duì)照組細(xì)胞無(wú)形態(tài)上的差異。 3．Western blot檢測(cè)驗(yàn)結(jié)果

5、表明，Macelignan可以抑制脂多糖所誘導(dǎo)的iNOS、COX-2、磷酸化的p3 8和CREB等蛋白的表達(dá)，LPS組與對(duì)照組之間、Macelignan組與LPS組之間有顯著性差異，P<0.05。 4.Western blot檢測(cè)結(jié)果表明，LPS與Macelignan對(duì)各組之間NF-kBP65表達(dá)無(wú)顯著性差異。 5.動(dòng)物神經(jīng)行為學(xué)測(cè)試結(jié)果，Macelignan可以抑制LPS所導(dǎo)致的逃避潛伏期的延長(zhǎng)，第三個(gè)循環(huán)開始LPS模

6、型組與對(duì)照組之間(P<0.01)、Macelignan組與LPS模型組之間有顯著性差異(P<0.05)。Probe檢測(cè)結(jié)果，Macelignan組與LPS組在藏有平臺(tái)的1/4象限內(nèi)游泳的時(shí)間有顯著性差異(P<0.05)。 6.免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果，Macelignan可以抑制LPS所誘導(dǎo)的被OX-6染色的活化的小膠質(zhì)細(xì)胞。 以上結(jié)果提示： 1.Macelignan在體內(nèi)可以抑制LPS所誘導(dǎo)的動(dòng)物的空間學(xué)習(xí)和記憶功

7、能的損害，并抑制了谷氨酸的細(xì)胞毒性作用，具有神經(jīng)保護(hù)作用。 2.Macelignan在體內(nèi)可以抑制LPS所誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞的活化，并抑制了BV2細(xì)胞在LPS誘導(dǎo)下產(chǎn)生的COX-2的表達(dá)，對(duì)神經(jīng)退行性疾病具有抗炎作用。 3.Macelignan抑制了BV2細(xì)胞在LPS誘導(dǎo)下產(chǎn)生的iNOS的表達(dá)，具有很好的抗氧化作用。 4.Macelignan抑制了BV2細(xì)胞在LPS誘導(dǎo)下產(chǎn)生的P-p38、CREB的表達(dá)。LPS和M