阿爾茨海默病免疫治療機制及血清炎癥因子水平的研究.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimer's Diease,AD)是癡呆最常見的類型,β淀粉樣肽(Amyloid-beta,Aβ)是AD的主要致病物質(zhì)。近二十年來,以Aβ為靶點的免疫治療是防治AD的熱點。研究發(fā)現(xiàn)在AD轉(zhuǎn)基因小鼠中,無論主動免疫還是被動免疫均能有效的清除腦內(nèi)的Aβ斑塊,降低腦脊液(Cerebrospinal fluid,CSF)中Aβ水平、提高血清中 Aβ水平并改善認知功能。主動免疫靈長類動物并未發(fā)現(xiàn)腦膜腦炎等病理改變。主動免疫

2、藥物AN1792臨床Ⅱ期試驗中因6％的AD患者出現(xiàn)了無菌性的腦膜腦炎被迫終止。被動免疫治療藥物bapineuzum,針對AβN端序列的人源化的單克隆抗體,Solanezum針對Aβ中間序列,在輕中度AD患者的Ⅲ期臨床試驗中與安慰組比較未顯示明顯的有效性,AD患者認知功能未改善。迄今為止完成的免疫治療臨床試驗均宣告失敗。
　　免疫治療失敗的機制目前不清楚,我們認為可能的機制為“揚灰效應”,即免疫治療中抗體透過血腦屏障(Blood B

3、rain Barrier,BBB)與Aβ斑塊結(jié)合,促進斑塊解聚為可溶性Aβ,進一步聚集為毒性最強的寡聚體。雖然這一過程有利于Aβ斑塊的清除,但同時增加了Aβ寡聚體的水平,進一步加重了神經(jīng)毒性作用。也有學者認為神經(jīng)炎癥參與了AD的病理改變,因此簡單清除腦內(nèi)Aβ斑塊并不能改善認知功能。研究發(fā)現(xiàn)在AD轉(zhuǎn)基因小鼠及AD患者Aβ斑塊周圍有神經(jīng)膠質(zhì)細胞的激活和炎癥因子的表達增高,抗炎因子的表達減低。在AD的病程中, Aβ可刺激神經(jīng)膠質(zhì)細胞激活釋放大

4、量的炎癥因子,炎癥因子可誘導Aβ的合成增加,表明炎性細胞因子的釋放與AD病理關(guān)系密切。目前有眾多關(guān)于外周血中炎癥因子水平的研臨床究,結(jié)果不統(tǒng)一。我們試圖探討:1.抗Aβ抗體解聚 Aβ纖維后,是否能促進神經(jīng)毒性更強的Aβ寡聚體形成。2.觀察AD患者血清中炎癥因子IL-6、IL-1β、TNF-α、IFN-γ的水平,探討炎癥因子與認知功能及癡呆嚴重程度的相關(guān)性。
　　一、材料和方法:
　　1.將Aβ單體孵育成Aβ纖維,用抗AβN端

5、抗體6E10、抗Aβ中段抗體4G8、抗AβC端抗體8G7及小鼠IgG與 Aβ纖維共同孵育以促進其解聚。離體實驗:采用Thioflavine T熒光法檢測Aβ纖維解聚作用;在TEM下觀察纖維及解聚物;孵育液離心后取上清,Western Blot法檢測寡聚體;MTT法和細胞軸突生長實驗觀察解聚所得寡聚體對SH-SY5Y細胞的神經(jīng)毒性作用。在體實驗:SD大鼠大腦皮層局部注射解聚物,觀察解聚物是否有局部神經(jīng)毒性作用。
　　2.以2010-

6、2013年在我院門診及住院的AD患者110例,同期我院體檢中心年齡、性別匹配認知功能正常的對照人群120例。收集臨床資料和靜脈血,采用酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)檢測血清中炎癥因子濃度。采用Wilcoxon秩和檢驗比較兩組間炎癥因子水平的差異;采用偏相關(guān)分析法分析血清中炎癥因子水平與認知功能(MMSE)和癡呆嚴重度(CDR)的相關(guān)性;非條件Logistic回歸法對A

7、D的影響因素進行多因素分析。
　　二、結(jié)果:
　　1.與4G8+Aβ纖維組、8G7+Aβ纖維組、IgG+Aβ纖維組和PBS+Aβ纖維組比較,6E10解聚Aβ纖維后,促進更多的Aβ寡聚體形成;抗AβN端抗體6E10解聚纖維形成的寡聚體具有抑制細胞軸突生長、促進細胞死亡的作用。
　　2.(1)AD患者血清中IL-6、IL-1β水平顯著高于對照組;(2)全部人群中IL-1β水平與MMSE呈負相關(guān)(r=-0.184,p=0.0