黃曲霉毒素B-,1-快速檢測試劑盒的研制.pdf

1、黃曲霉毒素B<,1>具有很強的毒性，1988年被國際癌癥機構(gòu)列為A類致癌物質(zhì)。黃曲霉毒素會降低動物的產(chǎn)奶產(chǎn)蛋量，危害人類的健康，對經(jīng)濟也造成一定的影響。為了對黃曲霉毒素進行有效監(jiān)控，必須有靈敏、特異、快速、可靠、容易普及的方法進行檢測。本項研究應(yīng)用雜交瘤技術(shù)制備抗黃曲霉毒素B<,1>的單克隆抗體，為建立ELISA方法檢測AFTBl奠定基礎(chǔ)。 本研究改進江湖等人報道的EDC法制備了檢測抗原AFTB<,1>-OVA。接下來實施免疫方

2、案，初次免疫為AFTB<,1>-BSA結(jié)合完全弗氏佐劑，足墊免疫，間隔四周后結(jié)合不完全弗氏佐劑加強免疫小鼠，最后一次免疫后三周通過尾靜脈或腹腔沖擊免疫小鼠，三到四天后取脾進行細胞融合。 在免疫方案實施的同時，確立檢測方法，以棋盤滴定試驗確定抗原1:100包被，免疫鼠血清1:5000稀釋作為陽性對照 (PC)，正常鼠血清1:100稀釋作為陰性對照(NC)，辣根過氧化物酶標(biāo)記羊抗鼠IgG1:400稀釋。 利用雜交瘤技術(shù)將免疫

3、Babl/c小鼠得到的脾細胞與SP2/0小鼠骨髓瘤細胞融合，間接ELISA方法篩選陽性細胞株。經(jīng)過八次融合，多次篩選，都得不到穩(wěn)定的陽性細胞株，故而進行了多克隆抗體的制備。 通過免疫家兔，獲得陽性血清，以正辛酸-硫酸銨沉淀方法純化血清，用免疫印跡實驗證明了該血清是抗黃曲霉毒素B<,1>的多抗，間接ELISA法測得純化后的多抗效價為2.56×10<'5>，間接性競爭法測得該抗體對黃曲霉毒素B<,1>的最低檢出濃度為0.051μg/