黃曲霉毒素B-,1-單克隆抗體的制備及應用.pdf

1、隨著世界經(jīng)濟的發(fā)展，人類生活水平的提高，人們在越來越多地關注食品對人的生命安全和身體健康的影響。在食品的污染因素中，真菌毒素對食品的污染是最嚴重的污染之一，而黃曲霉毒素因其對人、畜肝臟的劇烈損害而名列毒性之首。黃曲霉毒素(AFT)是一組真菌的次級代謝毒性產(chǎn)物。在天然污染的食品和飼料中以黃曲霉毒素B1(AFB1)最為常見，是黃曲霉菌產(chǎn)生毒素中的主要成分，其毒性和致癌性也最強，不僅給社會帶來重大的經(jīng)濟損失，而且嚴重威脅消費者的健康。世界各國

2、均制定了嚴格的AFT限量標準，且限量要求日益嚴格。我國目前還沒有自主研制、適合現(xiàn)場檢測的AFT檢測試劑盒和免疫親和柱，只有少數(shù)國家質(zhì)量監(jiān)督部門等機構使用極其昂貴的國外進口產(chǎn)品進行AFT抽樣檢測，根本無法有效地對食品、飼料生產(chǎn)的各個環(huán)節(jié)進行監(jiān)控，造成AFT污染十分嚴重。為了解決該現(xiàn)狀，迫切需要尋找一種經(jīng)濟、快捷、準確并且易于普及推廣的AFT檢測方法，進而能夠有效地對食品的生產(chǎn)、運輸、儲存和銷售進行監(jiān)控，保障廣大消費者的健康。 本研

3、究采用雜交瘤技術，以黃曲霉毒素B1(AFB1)—牛血清白蛋白(BSA)復合物為免疫原免疫BALB/C小鼠，制備了4株穩(wěn)定產(chǎn)生抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體的雜交瘤細胞株，分別命名為1D4，2A12，3B3，4A12，對其中的2A12細胞株分泌的抗體(以下簡稱2A12單抗)進行了綜合鑒定。2A12單抗屬IgG1，腹水效價1：5×105，親和常數(shù)1.67×1010L/mol。黃曲霉毒素類似物B1，B2，G1，G2，M1與2A12單抗的相對交叉反

4、應率分別為100％，52.5％，28.3％，20.0％，29.1％。表明該細胞株具廣譜性，這一特點有利于作AFT總量的測定。 2A12單抗應用于三種黃曲霉毒素檢測方法：1、免疫吸附法(ELISA)：檢測限為0.5ug/kg，檢測范圍0.5～50ug/kg。ELISA是常規(guī)檢測方法，通量較高，但不宜野外現(xiàn)場測定。 2、免疫親和層析—熒光光度計法(IAC-SFB)：檢測限低于1ug/kg，測量范圍1～300ug/kg。IAC

5、-SFB以免疫親和柱高效凈化樣品，真菌毒素熒光光度計直接報告測定結果，速度快，操作簡易、安全，且可發(fā)展為野外現(xiàn)場測定技術。 3、免疫親和層析—高效液相色譜法(IAC-HPLC)：檢測限低于1ug/kg，測量范圍1～300ug/kg。IAC-HPLC法同樣以免疫親和柱高效純化(凈化)樣品，高效液相色譜儀檢測分析。此方法既可對AFT各亞類單獨定量，亦可進行AFT總量測定，常用于確證分析。 以上三種方法的回收率均在70％以上，