肺炎克雷伯菌ESBLs檢測和KPC酶分析.pdf

1、背景和目的:
　　隨著廣譜抗菌藥物的廣泛應用,尤其是三代頭孢菌素的大量應用,產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(extended spectrum beta-lactamases,ESBLs)的肺炎克雷伯菌分離率有逐年增加之勢。ESBLs主要由革蘭陰性桿菌產(chǎn)生,是質(zhì)粒介導的能水解多種β-內(nèi)酰胺類抗生素的一類酶。ESBLs可通過接合、轉化、轉導等形式使耐藥基因在細菌間擴散,造成嚴重的院內(nèi)感染和耐藥菌株的廣泛傳播。肺炎克雷伯菌對碳青霉烯類抗生素非常

2、敏感,然而隨著碳青霉烯類抗生素(亞胺培南、美羅培南等)使用增多也出現(xiàn)了耐藥菌株。肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(Klebsiella pneumoniae carbapenemases,KPC)是近來新發(fā)現(xiàn)的一類碳青霉烯酶,能夠水解包括碳青霉烯類抗生素等多種β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物,并且KPC基因位于可轉移性質(zhì)粒上,使得KPC在菌株間傳播。臨床實驗室應重視對產(chǎn)ESBLs和KPC菌株的檢測和流行病學監(jiān)測,防止并控制由其引起的醫(yī)院感染的暴發(fā)流行。本研究

3、旨在了解醫(yī)院肺炎克雷伯菌耐藥性和產(chǎn)ESBLs的發(fā)生率、最佳篩選底物,并對亞胺培南耐藥的肺炎克雷伯菌進行了KPC耐藥基因型檢測和分析,明確其耐藥機制,為臨床合理使用抗生素提供依據(jù)。
　　方法:
　　對2009年1月-2010年10月蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院臨床分離出的124株肺炎克雷伯菌感染情況進行回顧性調(diào)查,并用 WHONET5.4軟件進行藥敏分析,明確其感染現(xiàn)狀和耐藥情況。選用頭孢他啶、頭孢噻肟、氨曲南、頭孢曲松進行ESBL

4、s表型初篩,雙紙片協(xié)同確證試驗檢測產(chǎn)ESBLs菌株。通過改良Hodge實驗(Modified Hodge Test,MHT)初篩產(chǎn)KPC酶肺炎克雷伯菌。聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction,PCR)和測序鑒定耐藥肺炎克雷伯菌是否帶有KPC基因,并通過網(wǎng)上GenBank的比對確定KPC基因型。用脈沖場凝膠電泳(pulsed-field gelelectrophoresis,PFGE)技術對KPC陽性菌株進行同源

5、性分析。質(zhì)粒轉移接合試驗確定KPC基因是否可以進行質(zhì)粒轉移。質(zhì)粒轉移后的接合子和原始的臨床菌用瓊脂稀釋法檢測碳青霉烯類抗生素的最小抑菌濃度(minimal inhibitory concentration,MIC)。
　　結果:
　　肺炎克雷伯菌的分布以ICU的檢出率較高,占17.74％,感染部位以呼吸道為主,占37.90%。實驗證明醫(yī)院ESBLs最佳篩選底物是頭孢噻肟,靈敏度高達95.5%,單用頭孢他啶作為篩選底物時漏檢率

6、最高。124株肺炎克雷伯菌共檢出產(chǎn)ESBLs42株,陽性率為33.87%。產(chǎn)ESBLs菌株對抗菌藥物的耐藥率明顯高于非產(chǎn) ESBLs菌株。124株肺炎克雷伯菌中有13株(10.48%)出現(xiàn)了亞胺培南耐藥。改良Hodge實驗初篩出10株肺炎克雷伯菌產(chǎn)KPC(76.92%),經(jīng)過PCR確證,有2株肺炎克雷伯菌KPC陽性(15.38%),測序結果表明,它們均屬于KPC-2型碳青霉烯酶基因。PFGE結果顯示醫(yī)院這2株細菌來源于同一克隆。接合試驗

7、發(fā)現(xiàn),接合菌獲得了碳青霉烯類抗生素耐藥基因,但與原始臨床菌株相比,接合子對碳青霉烯類抗生素的MIC值有所降低。
　　結論:
　　呼吸道感染是醫(yī)院肺炎克雷伯菌感染的主要途徑,臨床應重視空氣環(huán)境細菌學監(jiān)測;產(chǎn)ESBLs是肺炎克雷伯菌對青霉素類、三代、四代頭孢菌素類抗生素高耐藥的主要原因;產(chǎn)KPC是導致肺炎克雷伯菌對碳青霉烯類抗生素耐藥原因之一。本次研究在蚌埠地區(qū)首次分離出攜帶有KPC-2型碳青霉烯酶基因的肺炎克雷伯菌,KPC-2