血管緊張素-(1-7)通過上調(diào)內(nèi)皮型一氧化氮合酶的表達抑制循環(huán)纖維細胞的數(shù)量與功能.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：觀察血管緊張素-(1-7)[Ang-(1-7)]對外周血循環(huán)纖維細胞(CFs)數(shù)量與功能的影響。
　　 方法：采用Ficoll密度梯度離心法從外周血獲得單個核細胞，培養(yǎng)14天后，獲得貼壁的CFs，利用其表面雙重表達CD34和Ⅰ型膠原蛋白的特點對其進行細胞免疫熒光染色鑒定。于此同時，將細胞分成四組，即：對照組，預(yù)先加入Ang-(1-7)的拮抗劑A-779組，預(yù)先加入左旋硝基精氨酸甲基酯(L-NAME)組，同時預(yù)先加入兩種試劑

2、組，給予CFs不同濃度Ang-(1-7)(10nM，100nM，1μMor10μM)分別刺激24h、48h、72h。采用蘇木精-伊紅染色計數(shù)、CCK-8法測定CFs的增殖能力、AnnexinV/PropidiumIodide標(biāo)記法測定細胞凋亡能力，消化法測定羥脯氨酸濃度間接觀察細胞外膠原蛋白含量，利用westernbolt來檢測內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表達，利用Griess方法來檢測CFs分泌的一氧化氮(NO)含量。
　　

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