中暑所致大鼠門靜脈高壓及其臨床意義.pdf

1、背景與目的：
　　 門靜脈高壓癥(portal hypertension)是由不同因素引起的門靜脈血流受阻、血液淤滯和/或血流量增加而導(dǎo)致門靜脈系統(tǒng)壓力增高。門靜脈內(nèi)的血液主要來自于胃、腸、脾和胰,血液由門靜脈分支進入肝血竇,再由肝靜脈匯入下腔靜脈,門靜脈高壓并非一種獨立的疾病,所有能影響流出道受阻的因素均有可能形成門靜脈高壓。其突出的臨床表現(xiàn)為食管中下段、胃底靜脈曲張破裂出血,脾腫大、脾功能亢進、胃粘膜病變及腹水形成等。正常人

2、門靜脈壓力為13-24cmH2O,在生理情況下能有相當(dāng)大的波動,但這種波動是短暫的,不會引起內(nèi)臟循環(huán)的病理性變化。門靜脈高壓癥時,壓力大都增至30-50 cmH2O。門靜脈高壓是一類嚴重威脅人類健康的疾病,自然預(yù)后差,隨著對其認識的提高及檢查手段的不斷完善,大量的病例被診斷出來。近20年來,隨著基礎(chǔ)研究的不斷深入,諸多學(xué)科如消化內(nèi)鏡學(xué)、介入放射學(xué)以及臨床醫(yī)學(xué)等的許多學(xué)者,從不同領(lǐng)域,博采眾長,參與到門靜脈高壓癥的研究中,涌現(xiàn)出了許多新理

3、論、新技術(shù)和新進展。通常門靜脈高壓本身難以治愈,現(xiàn)在多傾向于對其并發(fā)癥的處理,特別是對上消化道大出血的治療。根據(jù)病人的情況一般采用藥物、內(nèi)鏡、介入放射學(xué)和外科手術(shù)的綜合性治療。臨床上內(nèi)鏡治療與藥物治療方面取得了一些突破性進展,但在手術(shù)治療方面,雖然手術(shù)方法繁多,對此病癥尚缺少一種理想的的方法。門靜脈高壓癥的手術(shù)方式隨著時代的發(fā)展,也在不斷地、螺旋式的前進,諸多的手術(shù)方法可分為分流術(shù)和斷流術(shù)及二者的結(jié)合與脾臟切除術(shù)。門靜脈高壓癥手術(shù)治療的

4、效果、預(yù)后在很大程度上取決于患者肝臟的儲備功能。肝功能良好者,治療效果較好,反之,則療效較差,預(yù)后不良。根據(jù)肝功能代償狀態(tài)的評定結(jié)果指導(dǎo)選擇合理的手術(shù)或非手術(shù)治療方式、正確預(yù)測患者的預(yù)后和治療效果,在臨床上具有非常重要的意義。目前國際通行的肝功能分級標準為Child-Pugh分級法。門靜脈高壓的病因繁多,發(fā)病機理復(fù)雜,在百余年來的研究及實踐中對門靜脈高壓癥的發(fā)生發(fā)展有了較為深刻的認識。我國是乙型肝炎病毒感染高發(fā)區(qū),在我國肝炎后肝硬化所致

5、的門靜脈高壓最為常見。非硬化性門靜脈高壓(NCPH)、肝小靜脈閉塞病(VOD)及布-加綜合征(BCS)都可致門靜脈高壓,且都涉及到肝臟血管病變所引起的門靜脈高壓,但具體病因尚不十分清楚,多傾向于農(nóng)業(yè)人群,似為農(nóng)業(yè)相關(guān)性疾病。夏秋季戶外勞動容易導(dǎo)致中暑,造成機體組織受熱力損傷,而有文獻報道肝臟是熱力的主要損傷部位。查閱國內(nèi)外文獻,少有熱力對肝臟的損傷相關(guān)報道,我們用大鼠制作了中暑模型以研究在中暑時大鼠的凝血狀態(tài)、肝臟血管及門靜脈壓力的變化

6、及其意義。
　　 材料與方法：
　　 本實驗共分兩個部分進行:
　　 (1)急性高熱條件大鼠中暑模型:觀察急性高熱條件下大鼠門靜脈壓力、凝血狀態(tài)變化、血漿內(nèi)毒素水平變化及肝臟形態(tài)學(xué)改變。
　　 雄性普通級Wistar大鼠20只,體重為90-100g,隨機分為2組:A組(10只),為正常對照組；B組(10只),為實驗組。置入溫度控制箱內(nèi),溫度控制器維持箱內(nèi)溫度為(42±0.5)℃、相對濕度為(40±5)％,

7、持續(xù)100分鐘,用沾石蠟油的體溫計測大鼠肛溫達43℃進入下一步實驗階段。在誘導(dǎo)急性高熱中暑模型時,觀察動物的活動和對外界刺激的反應(yīng)情況,實驗結(jié)束時記錄動物情況。將實驗組置于溫度箱外,室溫下10分鐘,5％苯巴比妥(7ml/kg,腹腔內(nèi)注射)麻醉,沿大鼠腹正中剪開腹壁,經(jīng)門靜脈插管用肝素鹽水測門靜脈壓力(PVP)并記錄,顯露心臟,5ml注射器右心房抽血,備用測PT全套及血漿內(nèi)毒素濃度；分別離斷上下腔靜脈,完整取下肝臟標本行大體觀察,隨后取第

8、二肝門處肝組織10％福爾馬林液固定保存,用于病理學(xué)檢查。
　　 (2)慢性高熱條件大鼠中暑模型:觀察慢性高熱條件下大鼠門靜脈壓力變化及肝臟形態(tài)學(xué)改變。
　　 雄性普通級Wistar大鼠50只,體重90-100g,隨機分為2組:C組(10只),為正常對照組；D組(40只),為實驗組。實驗組飼養(yǎng)在動物房內(nèi),自由進食飲水,每次實驗前12小時禁食,自由飲水,待大鼠安靜后實驗組置入溫度控制箱內(nèi),溫度控制器維持箱內(nèi)溫度為(42±0.

9、5)℃、相對濕度為(40±5)％,持續(xù)100分鐘,體溫計測肛溫達43℃進入下一步實驗階段。上述步驟實驗造模1周1次,連續(xù)4周。每次實驗后稱大鼠體重,根據(jù)大鼠體重下降程度皮下注射適量生理鹽水(體重下降1g補充生理鹽水1-2ml),進行補液治療,每次實驗后并給予水浴降溫。4次結(jié)束后存活大鼠在動物房內(nèi)繼續(xù)飼養(yǎng)4周。在誘導(dǎo)慢性高熱中暑模型時,觀察動物的活動和對外界刺激的反應(yīng)情況,實驗結(jié)束時記錄動物的死亡情況。8周末,5％苯巴比妥(7ml/kg,

10、腹腔內(nèi)注射)麻醉,沿大鼠腹正中剪開腹壁,經(jīng)門靜脈插管用肝素鹽水測門靜脈壓力(PVP)并記錄,顯露心臟,剪開右心房,用注射器將40ml生理鹽水由門靜脈緩慢注入,沖出肝內(nèi)淤血后分別離斷上下腔靜脈,完整取肝臟標本行大體觀察,隨后取第二肝門處肝組織10％福爾馬林液固定保存,用于病理學(xué)檢查。
　　 結(jié)果：
　　 ①急性高熱條件大鼠中暑模型:正常對照組大鼠狀態(tài)良好,毛發(fā)光澤度好,靈活好動。實驗組狂躁,相互攻擊,便溺,隨后精神萎靡,嗜

11、睡,對外界刺激反應(yīng)遲鈍；實驗組門靜脈壓力為(7.69±0.843)cmH2O,正常對照組大鼠門靜脈壓力為(6.75±0.92)cmH2O、兩者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；實驗組凝血四項結(jié)果分別為PT21.2±4.8s、PT-INR1.91±0.56、PT-％43.5±16.42％、FIB3.11±1g/t,,對照組凝血四項結(jié)果分別為PT16.1±0.32 s、PT-INR1.29±0.04、PT-％67.5±1.97％、FIB1

12、.87±0.68 g/L,差異顯著(P<0.05).內(nèi)毒素(LPS)含量兩組無顯著差異；對照組大鼠肝臟質(zhì)地柔軟濕潤,表面光滑。實驗組大鼠肝臟淤血明顯,色澤發(fā)暗,表面可見散在淤血點。HE染色可見:對照組肝小葉結(jié)構(gòu)完整,肝細胞排列整齊,匯管區(qū)清楚。實驗組肝內(nèi)小靜脈、肝竇均擴張淤血明顯,胞漿疏松,部分血管有紅細胞外滲,肝板內(nèi)可見水樣變性肝細胞,血管周圍有以淋巴細胞為主的炎癥細胞浸潤。
　　 ②慢性高熱條件大鼠中暑模型:正常對照組大鼠狀

13、態(tài)良好,毛發(fā)光澤度好,食量正常,大小便無異常,體重上升平穩(wěn),至實驗結(jié)束時達200-220g,無動物死亡。實驗組活動逐漸減少,精神萎靡,有相互攻擊,群鼠分食死鼠現(xiàn)象,對外界刺激反應(yīng)較為遲鈍,食欲不振,嗜睡,毛發(fā)蓬亂而少光澤,體重上升較對照組慢,至實驗?zāi)┻_180-210g,至實驗?zāi)嶒灲M大鼠死亡26只；實驗組大鼠門靜脈壓力(10.46±1.635)cmH2O,正常對照組大鼠門靜脈壓力(6.95±0.497)cmH2O,兩者差異具有統(tǒng)計學(xué)意義

14、(P<0.01)；對照組大鼠肝臟質(zhì)地柔軟濕潤,表面光滑,色澤均勻暗紅。對照組大鼠肝臟質(zhì)地柔軟濕潤,表面光滑,色澤均勻暗紅,富有彈性。實驗組大鼠肝臟體積腫大,色澤較暗,肝臟表面有散在淤血點,部分肝組織呈紅白相間。HE染色:光鏡下,對照組肝小葉結(jié)構(gòu)完整,肝細胞排列整齊,匯管區(qū)清楚。實驗組肝內(nèi)小靜脈、肝血竇擴張明顯,肝細胞胞漿疏松,部分血管周圍有紅細胞外滲情況較急性實驗?zāi)Ｐ蛧乐?血管內(nèi)皮細胞增生生芽,小葉間靜脈血栓形成,肝板內(nèi)水樣變性肝細胞數(shù)