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1、目的：ATRA對(duì)于足細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用,但具體機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建足細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激損傷模型,初步探討PDK1/AKT通路在ATRA足細(xì)胞損傷保護(hù)中的作用。
方法：體外條件下培養(yǎng)永生化小鼠足細(xì)胞細(xì)胞系,應(yīng)用TM(5μg/ml)構(gòu)建內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激損傷模型,將足細(xì)胞分為3組:對(duì)照組、TM組、ATRA組。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)對(duì)照組和損傷組不同時(shí)間點(diǎn)(0,4,8,12,24h)足細(xì)胞凋亡情況;RT-PCR檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)(0,6,12
2、h)各組足細(xì)胞GRP78、PDK1、AKT、CHOPmRNA表達(dá)情況;Western-blotting檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)(0,6,12h)各組GRP78、PDK1、AKT、p-AKT、CHOP蛋白表達(dá)情況。
結(jié)果：TM成功構(gòu)建細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的損傷模型。與對(duì)照組相比,TM組中足細(xì)胞凋亡隨時(shí)間延長(zhǎng)進(jìn)行性升高(P﹤0.05);GRP78、CHOPmRNA和蛋白表達(dá)呈時(shí)間依賴性表達(dá)上調(diào)(P﹤0.05);AKT,PDK1mRNA和蛋白表達(dá)未
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