內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在糖尿病腎組織足細(xì)胞損傷中的表達(dá)和意義.pdf

1、糖尿病腎病是糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥之一，中晚期以大量蛋白尿及彌漫腎小球硬化為主要表現(xiàn)。糖尿病腎病是引起終末期腎衰竭(End Stage RenalDisease，ESRD)的重要原因之一[1]。研究表明在糖尿病腎病發(fā)病過程中，足細(xì)胞數(shù)目明顯減少，并且減少的程度與蛋白尿量成正相關(guān)，足細(xì)胞數(shù)目越少，患者進(jìn)展至終末期腎衰竭的速度越快[2]。足細(xì)胞是高度分化的細(xì)胞，沒有再生功能。因此，足細(xì)胞數(shù)量減少所造成的腎小球?yàn)V過屏障破壞將無法修復(fù)[3]

2、。足細(xì)胞的特異性突觸連接蛋白(Synaptopodin)主要表達(dá)在細(xì)胞膜上，WT-1是足細(xì)胞特異性核蛋白，表達(dá)在細(xì)胞核上，通過對(duì)這兩者的觀察可以間接了解足細(xì)胞的損傷情況。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是細(xì)胞的一種適應(yīng)性反應(yīng)[4]，細(xì)胞在受到外界刺激時(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)會(huì)通過增加蛋白的降解和運(yùn)輸來加強(qiáng)細(xì)胞對(duì)有害刺激的抵抗能力。GRP78是一種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激分子伴侶，它的表達(dá)在一定程度上反映了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)對(duì)應(yīng)激調(diào)節(jié)的強(qiáng)度，有研究證實(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與腎組織損傷存在一定的關(guān)系，但是在糖尿病

3、腎病腎組織的足細(xì)胞上還缺乏深入的研究。
　　 我院陶建瓴副教授等[22]曾在早期糖尿病腎病動(dòng)物模型上觀察到ERS與腎組織足細(xì)胞損傷具有相關(guān)性，但是目前仍然缺乏有關(guān)ERS在糖尿病腎病中晚期及糖尿病前期腎組織足細(xì)胞損傷的體內(nèi)研究。本研究通過臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)兩部分分別對(duì)中晚期糖尿病腎病和糖尿病前期兩個(gè)階段進(jìn)行研究，以期了解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在糖尿病腎臟足細(xì)胞損傷中的表達(dá)和意義。
　　 研究目的：
　　 1、觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GR

4、P78在中晚期糖尿病腎病患者腎組織足細(xì)胞中的表達(dá):
　　 2、檢測糖尿病前期動(dòng)物模型中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是否激活，及與足細(xì)胞損傷的關(guān)系。
　　 研究方法：
　　 1、選取2001年1月至2011年1月北京協(xié)和醫(yī)院腎內(nèi)科接受腎活檢確診為DN的48例患者，分析其臨床資料，將患者分為尿蛋白量＞3.5g/d組(n=31)和尿蛋白量＜3.5g/d組(n=17)兩組。行威廉姆斯腫瘤蛋白1（WT-1）免疫組化染色。腎組織足細(xì)胞骨架蛋白

5、Synaptopodin和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78行免疫熒光雙染，在激光共聚焦顯微鏡下觀察。
　　 2、以SPF級(jí)Wistar大鼠36只為研究對(duì)象，分成實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組，每組大鼠18只，對(duì)實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行棕櫚酸鹽的飼養(yǎng)，對(duì)照組進(jìn)行正常飲食喂養(yǎng)，分別在3、6、9周檢測血清胰島素水平，進(jìn)行WT-1免疫組化染色檢測足細(xì)胞數(shù)量變化，同時(shí)免疫印記法(Western blotting)檢測Synaptopodin和GRP78的表達(dá)，觀察糖尿病前期腎

6、組織足細(xì)胞骨架蛋白Synaptopodin的損傷情況，及與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)之間的關(guān)系。
　　 研究結(jié)果：
　　 1、48例DN患者平均年齡為45.4±11.2歲，男女比例1∶1，病理類型表現(xiàn)為彌漫硬化型22例(46％)，結(jié)節(jié)硬化型26(54％)例。兩組之間足細(xì)胞WT-1陽性表達(dá)面積有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.003)，足細(xì)胞密度隨著尿蛋白量的增加逐漸降低，兩者之間呈負(fù)相關(guān)(P=0.005)。免疫熒光檢測腎小球Synaptop

7、odin及GRP78表達(dá)呈線樣沿基底膜排列，并且隨著尿蛋白量增加Synaptopodin和GRP78的表達(dá)量均降低，具有顯著差異性(P=0.004、P=0.001)。
　　 2、36只大鼠分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，結(jié)果顯示:1）實(shí)驗(yàn)組血清胰島素水平在飼養(yǎng)6周后發(fā)生明顯升高，和對(duì)照組比較在3周沒有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)，在第6和9周胰島素水平實(shí)驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)。2)實(shí)驗(yàn)組血脂、血糖及尿素氮等輕度升高，但與對(duì)照

8、組比較無明顯差異(P＞0.05)。3)腎組織足細(xì)胞核蛋白WT-1表達(dá)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組一致，均無明顯下降(P＞0.05)，實(shí)驗(yàn)組腎組織足細(xì)胞骨架蛋白Synaptopodin與對(duì)照組沒有明顯的差別(P＞0.05)，但內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78在6周開始明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，與胰島素升高狀態(tài)基本平行。
　　 結(jié)論：
　　 1.糖尿病腎病中晚期患者隨著尿蛋白量的增加，足細(xì)胞損傷情況逐漸加重，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白GRP78也隨著足