內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在糖尿病腎組織足細胞損傷中的表達和意義.pdf

1、糖尿病腎病是糖尿病最常見的微血管并發(fā)癥之一，中晚期以大量蛋白尿及彌漫腎小球硬化為主要表現(xiàn)。糖尿病腎病是引起終末期腎衰竭(End Stage RenalDisease，ESRD)的重要原因之一[1]。研究表明在糖尿病腎病發(fā)病過程中，足細胞數(shù)目明顯減少，并且減少的程度與蛋白尿量成正相關，足細胞數(shù)目越少，患者進展至終末期腎衰竭的速度越快[2]。足細胞是高度分化的細胞，沒有再生功能。因此，足細胞數(shù)量減少所造成的腎小球濾過屏障破壞將無法修復[3]

2、。足細胞的特異性突觸連接蛋白(Synaptopodin)主要表達在細胞膜上，WT-1是足細胞特異性核蛋白，表達在細胞核上，通過對這兩者的觀察可以間接了解足細胞的損傷情況。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激是細胞的一種適應性反應[4]，細胞在受到外界刺激時內(nèi)質(zhì)網(wǎng)會通過增加蛋白的降解和運輸來加強細胞對有害刺激的抵抗能力。GRP78是一種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激分子伴侶，它的表達在一定程度上反映了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)對應激調(diào)節(jié)的強度，有研究證實內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激與腎組織損傷存在一定的關系，但是在糖尿病

3、腎病腎組織的足細胞上還缺乏深入的研究。
　　 我院陶建瓴副教授等[22]曾在早期糖尿病腎病動物模型上觀察到ERS與腎組織足細胞損傷具有相關性，但是目前仍然缺乏有關ERS在糖尿病腎病中晚期及糖尿病前期腎組織足細胞損傷的體內(nèi)研究。本研究通過臨床和動物實驗兩部分分別對中晚期糖尿病腎病和糖尿病前期兩個階段進行研究，以期了解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在糖尿病腎臟足細胞損傷中的表達和意義。
　　 研究目的：
　　 1、觀察內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激蛋白GR

4、P78在中晚期糖尿病腎病患者腎組織足細胞中的表達:
　　 2、檢測糖尿病前期動物模型中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激是否激活，及與足細胞損傷的關系。
　　 研究方法：
　　 1、選取2001年1月至2011年1月北京協(xié)和醫(yī)院腎內(nèi)科接受腎活檢確診為DN的48例患者，分析其臨床資料，將患者分為尿蛋白量＞3.5g/d組(n=31)和尿蛋白量＜3.5g/d組(n=17)兩組。行威廉姆斯腫瘤蛋白1（WT-1）免疫組化染色。腎組織足細胞骨架蛋白

5、Synaptopodin和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激蛋白GRP78行免疫熒光雙染，在激光共聚焦顯微鏡下觀察。
　　 2、以SPF級Wistar大鼠36只為研究對象，分成實驗組及對照組，每組大鼠18只，對實驗組進行棕櫚酸鹽的飼養(yǎng)，對照組進行正常飲食喂養(yǎng)，分別在3、6、9周檢測血清胰島素水平，進行WT-1免疫組化染色檢測足細胞數(shù)量變化，同時免疫印記法(Western blotting)檢測Synaptopodin和GRP78的表達，觀察糖尿病前期腎

6、組織足細胞骨架蛋白Synaptopodin的損傷情況，及與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激狀態(tài)之間的關系。
　　 研究結果：
　　 1、48例DN患者平均年齡為45.4±11.2歲，男女比例1∶1，病理類型表現(xiàn)為彌漫硬化型22例(46％)，結節(jié)硬化型26(54％)例。兩組之間足細胞WT-1陽性表達面積有顯著統(tǒng)計學差異(P=0.003)，足細胞密度隨著尿蛋白量的增加逐漸降低，兩者之間呈負相關(P=0.005)。免疫熒光檢測腎小球Synaptop

7、odin及GRP78表達呈線樣沿基底膜排列，并且隨著尿蛋白量增加Synaptopodin和GRP78的表達量均降低，具有顯著差異性(P=0.004、P=0.001)。
　　 2、36只大鼠分為實驗組和對照組，結果顯示:1）實驗組血清胰島素水平在飼養(yǎng)6周后發(fā)生明顯升高，和對照組比較在3周沒有明顯的統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，在第6和9周胰島素水平實驗組明顯高于對照組(P＜0.05)。2)實驗組血脂、血糖及尿素氮等輕度升高，但與對照

8、組比較無明顯差異(P＞0.05)。3)腎組織足細胞核蛋白WT-1表達實驗組與對照組一致，均無明顯下降(P＞0.05)，實驗組腎組織足細胞骨架蛋白Synaptopodin與對照組沒有明顯的差別(P＞0.05)，但內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激蛋白GRP78在6周開始明顯高于對照組(P＜0.05)，與胰島素升高狀態(tài)基本平行。
　　 結論：
　　 1.糖尿病腎病中晚期患者隨著尿蛋白量的增加，足細胞損傷情況逐漸加重，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激蛋白GRP78也隨著足