TGF-β1-Notch信號通路在腎小球足細(xì)胞損傷中的作用及全反式維甲酸的干預(yù).pdf

1、第一部分TGF-β1/Notch信號通路在腎小球足細(xì)胞損傷中的表達(dá)和作用
　　目的:通過檢測阿霉素致腎小球足細(xì)胞損傷前后轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）、podocin、缺刻蛋白1(Notch1)、Jagged1的mRNA及其蛋白表達(dá)的變化，探討TGF-β1/Notch信號通路在腎小球足細(xì)胞損傷中的作用。
　　方法:體外培養(yǎng)MPC5(mouse podocyte clone5)腎小球足細(xì)胞，隨機分為正常組、阿霉素?fù)p傷組，正

2、常組足細(xì)胞在正常培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時，阿霉素?fù)p傷組在含阿霉素0.1μg/ml的培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時構(gòu)建足細(xì)胞損傷模型，光鏡觀察造模前后足細(xì)胞形態(tài)變化，采用實時熒光定量PCR(RT-PCR)及免疫印跡(western blot)法檢測兩組足細(xì)胞TGF-β1、podocin、Notch1、Jagged1的mRNA及其蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　(1)光鏡下正常組足細(xì)胞排列規(guī)整，大小均一，形態(tài)飽滿且輪廓清晰，細(xì)胞呈梭狀或多邊形，

3、而阿霉素?fù)p傷組足細(xì)胞排列紊亂，大小不一，細(xì)胞萎縮或者肥大且邊界不清晰，可見散在足細(xì)胞碎片;
　　(2)與正常組相比，阿霉素?fù)p傷組足細(xì)胞TGF-β1、Notch1、Jagged1的mRNA及其蛋白表達(dá)均顯著增高，而podocin的rmRNA及其蛋白表達(dá)均顯著降低。
　　(3)相關(guān)性分析:阿霉素?fù)p傷組足細(xì)胞Notch1、Jagged1的mRNA表達(dá)與TGF-β1的mRNA表達(dá)均呈顯著正相關(guān)，而Notch1、Jagged1的mRN

4、A表達(dá)與podocin的mRNA表達(dá)均呈顯著負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論:在阿霉素致足細(xì)胞損傷中，足細(xì)胞的TGF-β1/Notch表達(dá)顯著增高，TGF-β1/Notch信號通路可能參與了足細(xì)胞的損傷。
　　第二部分全反式維甲酸對腎小球足細(xì)胞損傷TGF-β1/Notch信號通路的影響
　　目的:通過檢測全反式維甲酸（ATRA）干預(yù)前后損傷足細(xì)胞TGF-β1、podocm、Notch1、Jagged1的表達(dá)變化，探討ATRA對阿霉素

5、致足細(xì)胞損傷中TGF-β1/Notch信號通路的影響。
　　方法:體外培養(yǎng)腎小球足細(xì)胞，隨機分為正常組、模型組、ATRA干預(yù)對照組、ATRA干預(yù)組。正常組足細(xì)胞不做任何處理，正常培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時;模型組足細(xì)胞在含阿霉素(0.1μg/ml)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時制備足細(xì)胞損傷模型;ATRA干預(yù)對照組足細(xì)胞在含ATRA（0.1μg/ml）的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24小時;ATRA干預(yù)組足細(xì)胞致?lián)p傷模型的建立方法同模型組，足細(xì)胞損傷后用ATR

6、A（0.1μg/ml）干預(yù)24小時。應(yīng)用倒置顯微鏡觀察各組足細(xì)胞形態(tài)變化，采用RT-PCR法檢測各組足細(xì)胞TGF-β1、podocin、Notch1、Jagged1的mRNA表達(dá)，采用western blot法測定各組足細(xì)胞TGF-β1、podocin、Notch1、Jagged1的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)在倒置顯微鏡下觀察，正常組與ATRA干預(yù)對照組足細(xì)胞形態(tài)學(xué)無顯著差別，細(xì)胞形態(tài)飽滿、輪廓清晰，而模型組足細(xì)胞突

7、觸減少或者消失，細(xì)胞萎縮或者肥大，可見大量散在足細(xì)胞碎片;ATRA干預(yù)組足細(xì)胞和正常足細(xì)胞相比變化不大。
　　(2)與模型組足細(xì)胞比較，ATRA干預(yù)組足細(xì)胞的TGF-β1、Notch1、Jagged1mRNA及其蛋白表達(dá)均顯著降低，而足細(xì)胞podocin的mRNA及其蛋白表達(dá)均顯著增高。
　　(3)正常組與ATRA干預(yù)對照組足細(xì)胞的各指標(biāo)之間均無顯著差異。
　　結(jié)論:在阿霉素致足細(xì)胞損傷中，ATRA能夠顯著降低TGF-