脾臟巨噬細胞的極化在大鼠熱射病模型中的研究.pdf

1、目的：
　　通過學習、借鑒國內外學者對熱射病動物模型的研究，結合本課題所能提供的實驗條件及技術水平構建符合本實驗要求的大鼠熱射病模型。在熱射病的病生機制研究中，內環(huán)境的炎性細胞因子的擴大反應占有較大的地位，巨噬細胞作為機體內免疫細胞的一種，介導著體內的炎性反應過程，通過分離、培養(yǎng)巨噬細胞，研究與其極化有關的iNOS、ArgⅠ兩種因子在熱應激處理后不同時間點的變化，進一步揭示巨噬細胞極化與熱射病大鼠兩者之間的關系，為臨床治療熱射病提

2、供新的靶點。
　　方法：
　　經改良處理的可控式恒溫箱控制熱暴露環(huán)境的溫度、濕度、暴露的時間，借鑒國內外學者熱射病動物模型的研究進展，采用溫度為40℃，濕度為60％的熱暴露處理，達到熱射病動物模型的診斷標準。通過采用實時定量PCR、Western Blot兩種實驗方法檢測熱處理即刻、1天、2天、3天、7天和對照組共6個點的大鼠脾臟巨噬細胞細胞表面標志物(iNOS、ArgⅠ)表達量的變化，來判定熱應激發(fā)生后不同時間點巨噬細胞的

3、極化方向。
　　結果：
　　將大鼠放置于溫度為40℃、濕度60％的熱應激環(huán)境中處理后，構建成功的符合本課題要求的大鼠熱射病模型。無菌操作取大鼠脾臟組織，經分離、純化等無菌操作后獲得數(shù)量較多的合格的大鼠脾臟巨噬細胞。實時定量PCR、Western Blot兩種實驗方法檢測熱處理后各時間點的實驗指標與對照組相比，iNOS除7天組無意義(P＞0.05)，余各組與對照組比有統(tǒng)計學意義(P＜0.05），但測得結果均小于對照組，表示實驗

4、組未出現(xiàn)M1型巨噬細胞極化。ArgⅠ在各點的數(shù)據有統(tǒng)計學意義(P＜0.05），在1天組ArgⅠ的含量逐漸升高，且高于同組iNOS表達量，提示在1天組后細胞向M2型方向轉變，起到保護機體的作用。
　　結論：
　　在熱射病的病理生理學變化的研究中，體溫調節(jié)中樞-下丘腦的功能紊亂、機體外熱環(huán)境對細胞的直接熱損傷作用、脂質氧化應激反應、內環(huán)境炎性細胞因子擴大級聯(lián)反應等都參與其中。其中炎性反應在熱射病的病理機制中發(fā)揮重大的作用，巨噬細