體外受精-胚胎移植周期中胚胎染色體非整倍體分析及移植價值探討.pdf

1、本研究旨在運用FISH技術(shù)檢測體外受精胚胎染色體的非整倍體分布并判斷其移植價值，為臨床在無2PN正常受精胚胎移植的情況下，是否選擇0PN、1PN胚胎移植提供理論依據(jù)。目的本研究擬通過FISH技術(shù)分析IVF-ET周期中胚胎的21號染色體的非整倍體情況，探討染色體非整倍體高發(fā)的影響因素及臨床利用價值，為臨床在無正常受精胚胎移植的情況下，是否選擇0PN、1PN胚胎移植提供理論依據(jù)。 方法 研究對象均選自2006年4月～2007

2、年1月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心經(jīng)IVF、卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射(introcytoplasmic sperm injection，ICSI)技術(shù)治療患者的D3廢棄胚胎。用于研究的胚胎均經(jīng)患者知情同意。收集廢棄胚胎，按受精方式分為IVF、ICSI組；根據(jù)D1天觀察的受精原核數(shù)目分為OPN、1PN、2PN、多PN組;按年齡分為<30歲、30～34歲、>135歲組：按獲卵數(shù)分為<17枚、≥117枚組；按超排方案分為人工授精(intra

3、uterine insemination，IUI)改IVF方案組、GnRH-a短方案組、CmRH-a長方案組。各組廢棄胚胎均采用透明帶OCTAX-Laser Shot激光打孔、吸拉法活檢卵裂球，進而Tween-20/HCI+甲醇/冰醋酸法裂解固定卵裂球，固定后用21號染色體特異位點探針(locus specific identifier,LSI)雜交行FISH，分析各組胚胎染色體非整倍體分布并比較差異。 所有數(shù)據(jù)采用SPSS13

4、．0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析，組間的差異采用獨立樣本的t檢驗，率的比較采用x<,2>檢驗。檢驗標準取α=0．05，以P<0．05為差異顯著性判定標準。 結(jié)果 1、胚胎活檢 IVF和ICSI周期中活檢292只廢棄胚胎，共獲得289個卵裂球，其中細胞完整、核清楚的卵裂球277只，活檢成功率95．8％。 2、卵裂球固定和雜交情況277只卵裂球細胞固定了250個，235個可見熒光信號，固定率為90．0％，出信號率為

5、94．0％。 3、卵裂球FISH結(jié)果3．1 IVF周期胚胎染色體的非整倍體結(jié)果IVF-ET周期中，0PN組和1PN組的胚胎染色體二體率分別為53．3％、58．1％，無顯著差異(P>0．05)，但均小于2PN組的73．1％(P<0．05)。染色體多體率在≥3PN組為81．9％，顯著高于OPN組的20．096、lPN組的19．4％、2PN組的11．5％(P<0．05)；≥3PN組的染色體二體率為9．1％，顯著低于0PN組的53．3％

6、、1PN組的58．1％、2PN組的73．1％(P<0．05)。0PN組和1PN組的胚胎染色體異常率分別為46．7％、41.9％，顯著高于2PN組的26．9％(P<0．05)，但均低于≥3PN組的90．9％(P<0．05)。 3．2 ICSI周期胚胎染色體的非整倍體結(jié)果ICSI周期的胚胎中，0PN組和1PN組的胚胎染色體二體率分別為45．2％、31．096，無顯著差異(P>0．05)。而2PN組胚胎染色體二體率為70．9％，顯著高

7、于其余各組(．P<0．05)。≥3PN組中，染色體二體率為29．0％，顯著低于2PN組(P<0．05)，多體發(fā)生率為67．8％，顯著高于其余三組(P<0．05)。0PN組和1PN組的胚胎染色體異常率分別為55．8％、69．0％，顯著高于2PN組的29．1％(P<0．05)。 3．3受精方式與染色體異常IVF周期胚胎中，1PN組的染色體非整倍體率為41．9％，顯著低于ICSI組的69．0％(P<0．05)，≥3PN組染色體異常率為

8、90．996，顯著高于ICSI組的71．0％(P<0．05)。0PN組、2PN組染色體異常率無顯著差異(P>0．05)。 3．4年齡與染色體異常與<30歲組的27．9％、15．4％、8．3％、37．5％相比，≥35歲組中0PN、1PN、2PN、≥3PN組胚胎染色體異常率分別為66．7％、64．5％、47．1％、90．3％，顯著增高(P<0．05)；與<30歲組相比，30～34歲組中0PN、1PN、≥3PN組胚胎的染色體異常率分別

9、為59．0％、86．8％、84．0％，也顯著增高(P<0．05)，而2PN組胚胎的染色體異常率為23．8％，無顯著差異(P>0．05)?！?5歲組與30～34歲組相比，各組胚胎染色體異常率無顯著差異(P>0．05)。 3．5獲卵數(shù)與染色體異常獲卵數(shù)≥17枚組的0PN、1PN、2PN、≥3PN胚胎的染色體異常率分別為55．9％、63．3％、20．7％、80．0％，與<17枚組的48．1％、45．2％、38．1％、82．4％相比，無

10、顯著差異(P>0．05)。 3．6不同排卵方案與染色體異常IUI改IVF方案組中的0PN、1PN、2PN、≥3PN組胚胎染色體異常率分別為23．1％、25．0％、7．1％、35．7％，與GnRH-a短方案組的70．8％、75．096、31．3％、96．2％比較，顯著偏低(P<0．05)；其中1PN、2PN、≥3PN組胚胎染色體異常率與GnRH-a長方案組的58．3％、40．096、91．7％比較，顯著降低(P<0．05)，0PN

11、胚胎染色體異常率與GnRH-a長方案組的70．8％相比無顯著差異(P>0．05)。GnRH-a短方案組與GnRH-a長方案組相比，兩組胚胎染色體異常率無顯著差異(P>0．05)。 結(jié)論 1．0PN胚胎和IVF周期中的1PN胚胎染色體二體率為45．2％～58．1％，提示為正常受精，具有一定的移植價值。在無2PN正常受精胚胎移植的情況下，可選擇0PN胚胎和IVF周期中的lPN胚胎移植，但建議結(jié)合胚胎植入前遺傳學(xué)診斷以及產(chǎn)前診

12、斷技術(shù)行染色體異常篩查。ICSI周期中l(wèi)PN胚胎染色體異常率高達69．0％，不具有移植價值。 2．2PN胚胎二體率為70．9％～73．1％，為胚胎移植的首選對象。2PN卵裂胚胎存在約8．3％～11．5％的染色體異常，可能是導(dǎo)致體外受精成功率低下的重要因素之一。 3．3PN卵裂胚胎多體率為67．8％～81．9％，提示染色體非整倍體高發(fā)，不具有移植價值。 4．年齡增高，特別是≥35歲；超排卵方案中Gn用量增加，可能增