解毒化瘀方對(duì)內(nèi)毒素血癥大鼠肝線粒體能量代謝影響.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)以線粒體能量代謝為主線，研究?jī)?nèi)毒素血癥時(shí)線粒體編碼基因表達(dá)改變，氧化磷酸化有關(guān)酶活性變化，線粒體氧化損傷以及線粒體膜電位變化，探討解毒化瘀方改善內(nèi)毒素血癥肝線粒體能量代謝障礙的可能作用機(jī)制。 方法：Wistar大鼠56只，隨機(jī)分為正常組及內(nèi)毒素組(分6h組、12h組、24h組)和解毒化瘀方組(分6h組、12h組、24h組)，每組8只，共7組。取肝組織進(jìn)行電鏡及光鏡檢測(cè)，采用自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清ALT、AST水平，采

2、用ELISA方法檢測(cè)血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)水平，采用高壓液相色譜分離法檢測(cè)肝線粒體ATP、ADP、AMP含量，采用分光光度計(jì)檢測(cè)肝線粒體琥珀酸脫氫酶(SDH)、Na+K+-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶活性、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)活性，采用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)細(xì)胞色素氧化酶(COX)活性，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)肝線粒體膜電位(△ψm)水平，采用RT-PCR法檢測(cè)肝m

3、tDNACOXⅠ、COXⅡ、COXⅢ、ATPase6、ATPase8mRNA表達(dá)變化。 結(jié)果：1.內(nèi)毒素組6h、12h、24h，血清ALT、AST水平逐步升高，與正常組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)，解毒化瘀方12h、24h組血清ALT、AST水平低于內(nèi)毒素組(P＜0.01)。光鏡結(jié)果顯示：內(nèi)毒素組肝竇擴(kuò)張，肝細(xì)胞嗜酸性交及壞死，匯管區(qū)見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，解毒化瘀方組肝組織學(xué)病變明顯好轉(zhuǎn)。電鏡結(jié)果顯示：內(nèi)毒素組肝線粒

4、體腫脹、嵴缺失甚至出現(xiàn)空泡變性，解毒化瘀方組肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)病變明顯改善。 2.內(nèi)毒素組6h、12h、24h，肝線粒體內(nèi)ATP含量明顯下降，與正常組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，24h最低，僅為正常組23％；ADP含量亦呈下降趨勢(shì)，12h組、24h組與正常組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；AMP含量，6h呈上升趨勢(shì)，12h開始下降，24h最低，24h組與正常組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；肝線粒體EC逐步下降，與正常組相

5、比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。解毒化瘀方24h組與內(nèi)毒素24h組相比，ATP含量增加，EC水平提高，兩組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 3.內(nèi)毒素組6h、12h、24h，肝線粒體內(nèi)SDH、Na+K+-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶及COX活性明顯下降，與正常組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。解毒化瘀方12h、24h組SDH、Na+K+-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶及COX活性與同時(shí)相內(nèi)毒素組相比均增加(

6、P＜0.05或P＜0.01)。 4.內(nèi)毒素組，6h血清TNF-α水平最高，12h、24h亦明顯高于正常組，與正常組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。解毒化瘀方6h、12h、24h組TNF-α水平均低于同時(shí)相內(nèi)毒素組(P＜0.05或P＜0.01)。 內(nèi)毒素組6h、12h、24h，線粒體MDA含量逐步升高，與正常組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；SOD、GSH-PX活性逐步下降，與正常組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

7、解毒化瘀方12h、24h組MDA的含量低于同時(shí)相內(nèi)毒素組(P＜0.05或P＜0.01)；解毒化瘀方6h、12h、24h組SOD活性均高于同時(shí)相內(nèi)毒素組(P＜0.05)；解毒化瘀方12h、24h組GSH-PX的活性高于同時(shí)相內(nèi)毒素組(P＜0.05)。5.內(nèi)毒素組6h、12h、24h，肝線粒體△ψm明顯下降，與正常組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；解毒化瘀方6h、12h、24h組線粒體△ψm均高于同時(shí)相內(nèi)毒素組(P＜0.05)。

8、 6.內(nèi)毒素組6h、12h、24h，COXⅠmRNA表達(dá)逐步下降，與正常組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，COXⅡmRNA表達(dá)亦下降(P＜0.01)，COXⅢmRNA表達(dá)與正常組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。解毒化瘀方24h組COXⅠmRNA表達(dá)高于內(nèi)毒素同時(shí)相組(P＜0.05)。內(nèi)毒素組6h、12h、24h，ATPase6、ATPase8mRNA表達(dá)逐步下降，與正常組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。解毒化瘀方24

9、h組ATPase6、ATPase8mRNA表達(dá)高于內(nèi)毒素同時(shí)相組(P＜0.05)。 結(jié)論：內(nèi)毒素造模后大鼠肝線粒體出現(xiàn)能量代謝障礙，肝線粒體ATP含量及能荷水平下降，解毒化瘀方能改善肝線粒體能量代謝障礙。其機(jī)制包括：增加線粒體SDH、Na+K+-ATP酶、Ca2+Mg2+-ATP酶及COX活性，提高線粒體△ψm水平，減輕線粒體氧化損傷，降低TNF-α水平，上調(diào)COX及ATPase基因表達(dá)。我們推測(cè)，解毒化瘀方改善肝線粒體能量代謝