清熱解毒涼血化瘀法對內(nèi)毒素肝損傷大鼠蛋白質(zhì)表達的干預(yù)作用.pdf

1、目的:探討清熱解毒涼血化瘀法對內(nèi)毒素肝損傷大鼠蛋白質(zhì)表達的干預(yù)作用。方法:(1)SD大鼠40只,隨機分為4組:正常組、模型組、中藥高劑量組、中藥低劑量組。(2)模型組:模型組大鼠每天用蒸餾水2ml灌胃,每天1次,連續(xù)7天。于末次灌胃1小時后腹腔注射脂多糖(LPS)(10mg/Kg)。腹腔注射及取血前禁食12小時以上,自由飲水。注射脂多糖6小時后,用1％戊巴比妥鈉(30mg/Kg)腹腔注射,麻醉動物后,酒精消毒皮膚,開胸,心臟取血。所有血

2、液放入4℃冰箱保存。用表面增強激光解析電離飛行時間質(zhì)譜技術(shù)(SELDI-TOF-MS技術(shù))檢測血清蛋白質(zhì)譜的差異表達。用全自動生化儀檢測肝功酶學(xué)指標。用顯色基質(zhì)鱟試劑盒檢測內(nèi)毒素濃度。取肝組織1.5cm×1cmx0.5cm,10％甲醛固定,常規(guī)病理切片,HE染色,光鏡下觀察肝組織病理變化。(3)中藥組:成人中藥用量為1.58g生藥/kg/天,根據(jù)體表面積公式,大鼠常規(guī)用量為10.20g生藥/kg/天。中藥高劑量組用中藥20.40g/kg

3、灌胃,每天1次,連續(xù)7天,余實驗方法同模型組；中藥低劑量組用中藥5.10g/kg灌胃,每天1次,連續(xù)7天,余實驗方法同模型組。(4)正常組:正常組大鼠每天用蒸餾水2ml灌胃,每天1次,連續(xù)7天,于末次灌胃1小時后腹腔注射等量蒸餾水,余實驗方法同模型組。結(jié)果:(1)各組內(nèi)毒素水平:與模型組比較,中藥高劑量組、中藥低劑量組的血液內(nèi)毒素水平降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與中藥低劑量組比較,中藥高劑量組的血液內(nèi)毒素水平降低,差異有統(tǒng)計

4、學(xué)意義(P<0.05)。(2)肝臟生化檢查結(jié)果:與模型組比較,中藥高劑量組、中藥低劑量組的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶水平(AST)降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。與中藥低劑量組比較,中藥高劑量組的ALT、AST,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。(3)蛋白質(zhì)芯片共捕獲到115個差異表達蛋白峰,其中,11個差異表達蛋白峰有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。相對分子質(zhì)量為42002道爾頓的蛋白峰在中藥干預(yù)組的血清中高表達；相對分

5、子質(zhì)量為8984道爾頓、9005道爾頓的蛋白峰在中藥干預(yù)組低表達。(4)光學(xué)顯微鏡下觀察:①正常組:肝板紋理清楚,肝細胞排列整齊,索狀結(jié)構(gòu)清晰。②模型組:可見炎細胞浸潤,核固縮,較多脂肪滴,索狀結(jié)構(gòu)不清,肝竇狹窄,肝細胞排列紊亂。③中藥高劑量組可見肝板紋理比較清楚,有少量炎細胞。肝細胞排列較整齊。索狀結(jié)構(gòu)清晰。④中藥低劑量組可見肝板紋理比較清楚,肝細胞腫脹、炎細胞及中央靜脈擴張淤血。結(jié)論:(1)清熱解毒涼血化瘀中藥能降低內(nèi)毒素肝損傷大鼠