鹿茸活性成分的提取及一種新型微膠囊的制備.pdf

1、鹿茸是傳統(tǒng)名貴中藥,具有溫腎壯陽、益精補(bǔ)血、強(qiáng)筋健骨等功效.鹿茸的化學(xué)成分比較復(fù)雜,含有多種重要的活性物質(zhì):如不飽和脂肪酸和溶血卵磷脂等具有降低血壓、治療心血管疾病的作用；對羥基苯甲醛(PHBD)、次黃嘌呤和磷脂等具有抑制單胺氧化酶(MAO)的作用；雌激素、孕酮等激素對女性更年期綜合癥有預(yù)防和治療作用；胰島素樣生長因子-Ⅰ(IGF-1)和生長激素(GH)可促進(jìn)生長發(fā)育、用來治療糖尿病、骨質(zhì)疏松等疾病.現(xiàn)有的鹿茸加工方式比較粗放,產(chǎn)品結(jié)構(gòu)

2、單一,為進(jìn)一步拓寬鹿茸的市場應(yīng)用空間,提高其附加值,本課題采用超臨界流體萃取技術(shù)、超聲波強(qiáng)化提取技術(shù)和其它蛋白質(zhì)分離純化技術(shù),從鹿茸中提取三類功效明確、在臨床上具有重要應(yīng)用價(jià)值的活性成分:包括單胺氧化酶抑制劑、天然雌激素和IGF-1等活性多肽.采用動(dòng)態(tài)法實(shí)驗(yàn)測定了PHBD在超臨界C02中的溶解度；另外還對利用干酵母(S.cerevisiae)細(xì)胞作為囊壁材料制備微膠囊進(jìn)行了初步研究. 首先采用超臨界CO<,2>萃取水炸干鹿茸中具

3、有抗衰老作用的單胺氧化酶抑制劑.通過對萃取溫度、萃取壓力、夾帶劑種類和原料粒度的考察,確立最佳萃取工藝條件,提取率可以達(dá)到3.58﹪,萃取物對MAO-B的總抑制活性可以達(dá)到3319.13U/g.萃取物對MAO-B的抑制作用呈明顯的量效關(guān)系:當(dāng)萃取物溶液的濃度為278.15 mg/L時(shí),對MAO-B的抑制作用達(dá)到93.77﹪,但對MAO-A的抑制率只有24.18﹪.利用HPLC、TLC、GC、GC-MS和放射免疫分析等方法對萃取物的化學(xué)組

4、成進(jìn)行分析,萃取物中除含有對MAO有抑制作用的活性成分次黃嘌呤、對羥基苯甲醛和磷脂外,還含有不飽和脂肪酸、谷甾醇、維生素E、甾體化合物、膽固醇、雌二醇、睪酮和孕酮等物質(zhì). 另外,采用超臨界流體萃取和濃縮干鹿茸中的雌激素,雌二醇提取率可以達(dá)到0.3342 ng/g鹿茸.萃取物中雌二醇和孕酮含量分別為48.42 ng/g和197.04ng/g,有望作為開發(fā)成預(yù)防和治療女性更年期綜合癥產(chǎn)品的原料. 采用超聲波強(qiáng)化提取鮮鹿茸中的

5、:IGF-1.考察了溶液種類和pH、浸提溫度、浸提時(shí)間、浸提液用量、浸提次數(shù)及超聲功率等因素的影響.以pH10.0的Ⅰ號緩沖液作浸提液,IGF-1的提取率可以達(dá)到5279.29 ng/g鮮茸.采用超聲波強(qiáng)化提取具有提取率高、提取速度快的優(yōu)點(diǎn).選用10 kDa的超濾膜,將IGF-1粗提液濃縮6～10倍,.IGF-1損失率僅為2.49﹪,且超濾濃縮速度快.利用無水乙醇去除雜蛋白質(zhì)的效果最佳,雜蛋白質(zhì)去除率為91.59﹪,IGF-1含量提高8

6、.97倍,IGF-1損失率為24.52﹪.通過陽離子交換層析,總蛋白中IGF-1的含量提高了12.01倍,IGF-1和蛋白質(zhì)的回收率分別為91.73﹪和66.85﹪.進(jìn)一步通過SDS-PAGE和高效毛細(xì)管電泳鑒定,表明鮮鹿茸提取液中含有IGF-1.另外,通過放射免疫分析法檢測,鹿茸的IGF-1粗提液中還含有生長激素. 以鹿茸凍干粉為原料,首先采用超臨界純CO<,2>萃取鹿茸中的單胺氧化酶抑制劑等脂類活性物質(zhì),然后采用溶劑浸提萃余

7、物中IGF-1等活性多肽.結(jié)果表明,綜合提取鹿茸中的脂類活性物質(zhì)和IGF-1等多肽是可行性的. 利用動(dòng)態(tài)法實(shí)驗(yàn)測定了對羥基苯甲醛(PHBD)在超臨界C02中的溶解度,考察改變溫度或壓力對其溶解度的影響.當(dāng)溫度恒定時(shí),PHBD在超臨界CO<,2>中的溶解度隨壓力增加而增大；PHBD溶解度隨溫度變化趨勢比較復(fù)雜.利用溶解度與壓力和對比密度兩個(gè)經(jīng)驗(yàn)方程進(jìn)行關(guān)聯(lián),關(guān)聯(lián)誤差在3.67～11﹪之間,表明這兩個(gè)方程可用于PHBD在CO<,2>

8、中溶解度的關(guān)聯(lián).利用PR-EOS計(jì)算值較實(shí)驗(yàn)結(jié)果有較大誤差. 分別以丁香油和水楊酸甲酯為囊芯,以干酵母細(xì)胞作為囊壁材料制備一種新型的微膠囊.通過對包埋溫度、芯材比及包埋時(shí)間等因素的考察,確定了最佳制備工藝條件,微膠囊中丁香油包埋率可以達(dá)到41.26﹪,而水楊酸甲酯包埋率為48.58﹪.通過顯微鏡和電鏡觀察,微膠囊呈規(guī)則的球形,大小均一,直徑在2.0～4.0μm之間.這種新型的微膠囊制備方式,具有操作簡單、包埋率高、不引入有機(jī)溶劑