旋覆花內(nèi)酯對(duì)血管內(nèi)皮剝脫誘導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶-2及其組織抑制劑表達(dá)的影響.pdf

1、目的：PTCA術(shù)后血管再狹窄(restenosis，RS)的發(fā)病機(jī)制及防治是目前心血管疾病的一個(gè)研究熱點(diǎn)。RS的發(fā)生是一個(gè)血管損傷后新生內(nèi)膜增生和血管重構(gòu)的過(guò)程。這與血管壁細(xì)胞外基質(zhì)的代謝失衡密切相關(guān)?；|(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)是體內(nèi)較為重要的一類蛋白水解酶。組織金屬蛋白酶抑制劑(tissueinhibitorsofmetalloproteinases，TIMPs)作為MMPs的天然抑制

2、劑與MMPs一起調(diào)控細(xì)胞外基質(zhì)代謝。在血管組織中以MMP-2/TIMP-2系統(tǒng)最為重要。旋覆花內(nèi)酯(1-o-acetylbritannilactone，ABL)是我們從旋覆花中提取的一種苯并呋喃酮衍生物，通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)已證實(shí)其可抑制血管細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。但尚未在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明其對(duì)RS的防治效果。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)球囊內(nèi)皮剝脫術(shù)建立的大鼠血管損傷狹窄模型，觀察血管損傷后新生內(nèi)膜形成過(guò)程中MMP-2和TIMP-2的表達(dá)變化及ABL對(duì)RS形成以及MMP-2

3、和TIMP-2表達(dá)的影響。 方法： 1動(dòng)物模型的復(fù)制及分組： 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常規(guī)麻醉消毒；沿頸部正中線切口，于氣管左側(cè)分離左側(cè)頸總動(dòng)脈；于頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)端剪一楔形切口，球囊導(dǎo)管自切口處經(jīng)頸總動(dòng)脈插入至胸腹主動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，充盈球囊后將其拖回到胸主動(dòng)脈起始部，如此反復(fù)三次；球囊減壓后退回至頸總動(dòng)脈近心端，再次充盈球囊，其余操作同上；退出球囊，結(jié)扎頸總動(dòng)脈，關(guān)閉切口。實(shí)驗(yàn)分組1：將大鼠分為正常組、術(shù)后1天組、術(shù)后3天組、術(shù)后7天組

4、、術(shù)后14天組及術(shù)后21天組。實(shí)驗(yàn)分組2：將大鼠分為正常組、治療組及模型組。治療組術(shù)前三天及術(shù)后至14天灌胃服用ABL粗品，劑量為26mg/kg體重/天，每天2次。模型組大鼠，以同樣方式給予相同劑量的生理鹽水。于術(shù)后21天處死動(dòng)物。 2實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的處理： 于上述不同時(shí)間從股動(dòng)脈放血處死大鼠，分離內(nèi)皮剝脫的主動(dòng)脈標(biāo)本。取主動(dòng)脈中段血管進(jìn)行病理切片，HE染色觀察血管壁的增生情況并進(jìn)行形態(tài)測(cè)量學(xué)分析；提取主動(dòng)脈總蛋白，明膠酶圖分

5、析檢測(cè)血管壁中MMP-2活性的變化；Westernblot分析和病理切片免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)血管壁中MMP-2及其抑制劑TIMP-2的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1血管內(nèi)皮剝脫對(duì)MMP-2水解活性以及MMP-2和TIMP-2表達(dá)的影響： 對(duì)明膠酶圖結(jié)果進(jìn)行分析證實(shí)，實(shí)驗(yàn)所用標(biāo)本中含有的明膠酶主要為活性型MMP-2。內(nèi)皮剝脫術(shù)后14天和21天，血管組織中MMP-2活性明顯高于正常組織。同時(shí)Westernblot結(jié)果顯示，M

6、MP-2及TIMP-2的表達(dá)也在術(shù)后14天和21天較正常組顯著提高(P＜0.05)。 2ABL對(duì)血管內(nèi)皮損傷誘導(dǎo)的內(nèi)膜增生的影響： 病理切片顯示，術(shù)后21天，內(nèi)膜呈彌漫性增厚，管腔變小，增厚的內(nèi)膜中以VSMC為主。給予ABL治療組，血管內(nèi)膜增生明顯被抑制。形態(tài)測(cè)量分析表明：ABL治療組的血管內(nèi)膜厚度和內(nèi)膜/中膜厚度比值均低于模型組(P＜0.05)。 3ABL對(duì)血管內(nèi)皮損傷誘導(dǎo)的MMP-2水解活性以及MMP-2和T

7、IMP-2表達(dá)的影響： 明膠酶圖結(jié)果顯示，ABL治療組中MMP-2的水解活性較模型組顯著降低(P＜0.05)，并接近至正常組水平。同時(shí)Westernblot和免疫組化結(jié)果表明，治療組中MMP-2和TIMP-2的表達(dá)與模型組相比也顯著降低至正常組表達(dá)水平。 結(jié)論： 1血管內(nèi)皮損傷后狹窄的發(fā)生與MMP-2水解活性以及MMP-2和TIMP-2表達(dá)的增加有關(guān)。 2ABL能夠有效抑制血管內(nèi)皮剝脫后新生內(nèi)膜的增生，進(jìn)