同型半胱氨酸對人血管內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察不同濃度的同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)在1、6、24小時對血管內(nèi)皮細(xì)胞(veinendotheliacell，VEC)的基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetallopoeinases，MMPs)基因表達(dá)的影響，在基因表達(dá)水平探討同型半胱氨酸損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，誘發(fā)動脈粥樣硬化和斑塊破裂的相關(guān)機制。 方法：在體外培養(yǎng)的人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株CRL-1730(humanumbilicalveinvasc

2、ularendotheliacell，，HUVEC)中加入終濃度為0、10、50、100、1000μmol/L的同型半胱氨酸共同孵育，分別于1，6，24小時收集細(xì)胞。使用柱式總RNA提取試劑盒裂解細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA。采用逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)半定量檢測不同濃度、不同時間點同型半胱氨酸刺激后CRL-1730細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子-1(tissueinhibito

3、rsofmetalloproteinases，TIMP-1)mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：(1)無同型半胱氨酸(0μmol/L)和生理濃度同型半胱氨酸(10μmol/L)存在時，人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)株CRL-1730即有MMP-1，MMP-9和TIMP-1mRNA的表達(dá)。6小時、24小時與1小時比較，MMP-1mRNA的表達(dá)和MMP-1/TIMP-1mRNA的比值顯著降低(P＜0.01)，6小時與24小時表達(dá)無差別(P＞

4、0.05)。MMP-9mRNA的表達(dá)和MMP-9/TIMP-1mRNA的比值6小時、24小時與1小時比較顯著上調(diào)(P＜0.01)，6小時與24小時表達(dá)無差別(P＞0.05)。TIMP-1mRNA的表達(dá)在1、6、24小時無差別(P＞0.05)。 (2)病理濃度同型半胱氨酸(≥50μmol/L)刺激HUVECCRL-1730細(xì)胞后可誘導(dǎo)MMP-1mRNA表達(dá)呈劑量依賴式上調(diào)(P＜0.01)，兩者成呈正相關(guān)(P＜0.05)。中低濃度同

5、型半胱氨酸(50μmol/L、100μmol/L)可上調(diào)MMP-9mRNA的表達(dá)(P＜0.01)，高濃度(1mmol/L)刺激使MMP-9mRNA的表達(dá)較中低濃度組下降(P＜0.01)。TIMP-1mRNA的表達(dá)只有低濃度組(50μmol/L)較生理情況上調(diào)(P＜0.01)，中高濃度組(100μmol/L、1mmol/L)無改變(P＞0.05)，不同病理濃度組比較，TIMP-1mRNA的表達(dá)隨濃度升高表達(dá)下調(diào)，表現(xiàn)為劑量依賴性方式。(3

6、)不同濃度的同型半胱氨酸刺激下，MMP-1/TIMP-1、MMP-9/TIMP-1mRNA比值呈劑量依賴式上調(diào)(P＜0.05)，兩者呈正相關(guān)(P＜0.05)。 結(jié)論：(1)在生理條件下，人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞CRL-1730細(xì)胞株即可以表達(dá)MMP-1、MMP-9和TIMP-1mRNA，其表達(dá)量及MMP-1/TIMP-1和MMP-9/TIMP-1mRNA的比值在短時間內(nèi)(≤6小時)達(dá)到平衡狀態(tài)并維持不變。說明血管內(nèi)皮細(xì)胞MMPs及T

7、IMPs的表達(dá)為細(xì)胞本身固有的并維持在穩(wěn)定水平和比例。在生理條件下，血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)MMPs和TIMPs，調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的代謝，維持細(xì)胞外基質(zhì)的動態(tài)平衡。 (2)病理濃度的同型半胱氨酸可改變血管內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶及其抑制劑mRNA的表達(dá)，使血管內(nèi)皮細(xì)胞MMP-1的表達(dá)呈劑量依賴式上調(diào)，表達(dá)時間曲線上移。并呈劑量依賴式上調(diào)MMP-9/TIMP-1及MMP-1/TIMP-1mRNA表達(dá)的比值。說明同型半胱氨酸可在基因表達(dá)水平影響