放射性碘原子標(biāo)記hVEGF-siRNA的實驗研究.pdf

1、目的：探討放射性碘標(biāo)記siRNA的方法，以期建立體內(nèi)腫瘤顯像、基因靶向和放射性靶向協(xié)同治療體系。
　　 方法：設(shè)計人血管內(nèi)皮生長因子小干擾RNA，通過RT-PCR和Western blotting驗證其有效性。利用Bolton-Hunter試劑間接將人VEGF siRNA標(biāo)記上放射性碘原子并通過3％瓊脂糖凝膠電泳、電泳圖譜自顯影和高效液相色譜法驗證。標(biāo)記后的siRNA在37℃下與50％胎牛血清分別孵育24、48、72h后，通過2

2、0％聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測其血清穩(wěn)定性。以甲醇和5％醋酸銨（1:1）混合液、丙酮和生理鹽水（1:1）混合液為展開劑，131I標(biāo)記后的siRNA分別點樣于薄層層析硅膠板和新華一號濾紙，展開后放入薄層掃描儀掃描，測標(biāo)記后siRNA放化純。Lipofectamin2000介導(dǎo)碘標(biāo)記hVEGF siRNA轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，通過Real time PCR檢測標(biāo)記后siRNA生物活性。
　　 結(jié)果：設(shè)計并合成有效的人VEGF siRNA序

3、列，并成功的利用Bolton-Hunter試劑標(biāo)記上放射性碘原子。標(biāo)記碘原子后的siRNA，具有良好血清穩(wěn)定性和較高的放化純（＞80％）。不論是131I-siRNA還是127I-siRNA，其降解目的mRNA的活性不發(fā)生改變，標(biāo)記過程不影響siRNA生物活性。同時，Lipofectamin2000在一定程度上還會降低VEGF mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)論：放射性碘原子成功的標(biāo)記人VEGF siRNA，為之后研究siRNA靶向轉(zhuǎn)運、