曲克蘆丁及類似物腦內(nèi)藥動(dòng)學(xué)及部分機(jī)制研究.pdf

1、曲克蘆丁是蘆丁經(jīng)羥乙基化制成的半合成的黃酮類化合物，是心腦血管藥維腦路通中的主要成分，臨床上用來(lái)治療腦梗塞及中風(fēng)后遺癥等疾病。蘆丁在臨床用于防治腦溢血、高血壓、視網(wǎng)膜出血、紫瘢和急性出血性腎炎等疾病，治療腦血管病有效率達(dá)87.8％。曲克蘆丁苷元是曲克蘆丁經(jīng)水解得到的苷元。結(jié)構(gòu)上，曲克蘆丁比蘆丁多了三個(gè)羥乙基，比曲克蘆丁苷元多了兩個(gè)蕓香糖。有報(bào)道稱黃酮類化合物在生物體內(nèi)主要是糖苷鍵被水解后以苷元的形式發(fā)揮藥理效應(yīng)。
　　近來(lái)有數(shù)篇關(guān)

2、于曲克蘆丁腦部藥理作用的報(bào)道。故本研究主要從曲克蘆丁及類似物的理化性質(zhì)、對(duì)腦部的藥效作用、小鼠腦部藥動(dòng)學(xué)、及曲克蘆丁及類似物透過(guò)血腦屏障的部分機(jī)制等多層面進(jìn)行了研究，主要如下：
　　1.曲克蘆丁及類似物的理化性質(zhì)
　　采用搖瓶-UPLC法測(cè)定曲克蘆丁及類似物在水、乙醇中的平衡溶解度和正辛醇-水中的油水分配系數(shù)。37℃下，曲克蘆丁、蘆丁及曲克蘆丁苷元的平衡溶解度分別為水中＞1000g·L-1、0.16±0.01g·L-1、0.

3、12±0.01g·L-1，乙醇中2.13±0.02 g·L-1、3.34±0.09g·L-1、1.53±0.06g·L-1，提示曲克蘆丁、蘆丁、曲克蘆丁苷元的脂溶性越來(lái)越大；曲克蘆丁、蘆丁、曲克蘆丁苷元的LogP值分別為-1.9195±0.10、-0.7308±0.20、1.7922±0.10，初步推斷曲克蘆丁、蘆丁、曲克蘆丁苷元透過(guò)血腦屏障的能力可能逐漸增強(qiáng)。
　　2.曲克蘆丁及類似物對(duì)學(xué)習(xí)記憶的影響
　　為了考察曲克蘆丁

4、及類似物對(duì)腦部的藥理活性，選用60只SD大鼠分為六組：陽(yáng)性藥物組、曲克蘆丁組、蘆丁組、曲克蘆丁苷元組、模型組、空白組，每組十只，陽(yáng)性組腹腔注射1.3g·kg-1的吡拉西坦、藥物組分別腹腔注射52 mg·kg-1的曲克蘆丁及類似物，模型組和空白組腹腔注射同體積生理鹽水，十天后，通過(guò)腹腔注射1.5mg·kg-1東莨菪堿造成學(xué)習(xí)記憶障礙模型，采用Morris水迷宮和Y迷宮考察曲克蘆丁及類似物對(duì)東莨菪堿造成的大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的作用。結(jié)果表明：曲

5、克蘆丁及蘆丁可顯著改善東莨菪堿造成的大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙（P＜0.05），而苷元?jiǎng)t無(wú)明顯作用（P＞0.05）。
　　3.曲克蘆丁及類似物腦內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)
　　采用甲醇蛋白沉淀的方法提取小鼠腦組織中的曲克蘆丁、蘆丁和曲克蘆丁苷元，建立了曲克蘆丁及類似物的UPLC-MS/MS分析方法，腦組織中曲克蘆丁、蘆丁、曲克蘆丁苷元濃度在1～400ng·ml-1內(nèi)線性均良好（0.999以上），基質(zhì)效應(yīng)在90%～100%之間，回收率在92%～99%

6、之間，日內(nèi)日間 RSD均＜6.0%、穩(wěn)定性 RSD均＜5.0%，穩(wěn)定性良好。本方法的回收率、精密度均符合要求，專屬性強(qiáng)無(wú)基質(zhì)效應(yīng)，簡(jiǎn)單、靈敏、準(zhǔn)確，適用于小鼠腦組織中的曲克蘆丁及類似物的腦部藥代動(dòng)力學(xué)研究。
　　昆明小鼠分別尾靜脈注射60mg·kg-1曲克蘆丁、蘆丁及曲克蘆丁苷元，在0.08h、0.25h、0.5h、1h、2h、4h、6h、8h、12h、24h取腦組織，用UPLC-MS/MS分析，所得結(jié)果采用非房室模型計(jì)算，進(jìn)行相

7、關(guān)腦部藥代動(dòng)力學(xué)研究。曲克蘆丁、蘆丁及曲克蘆丁苷元的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)為：Tmax均為0.8min，Cmax分別為888.07±15.06ng·g-1、303.20±5.73ng·g-1和294.72±10.00ng·g-1，t1/2分別為6.01±1.39h、6.86±2.34h和5.29±1.25h，MRT分別為2.43±0.10h、2.29±0.19h和2.73±0.17h，K分別為0.11±0.03h-1、0.11±0.04h-

8、1和0.14±0.03h-1，AUC0-t分別為495.64±14.36ng·g-1·h、180.08±6.09ng·g-1·h和193.65±9.77ng·g-1·h。并且曲克蘆丁組Cmax和AUC0-t比另兩組藥物組高的多，即分子量最大logP最小的曲克蘆丁透過(guò)血腦屏障的量最大，提示可能存在其他因素造成曲克蘆丁及類似物透過(guò)血腦屏障的差異。
　　4.曲克蘆丁及類似物通過(guò)血腦屏障的部分機(jī)制研究
　　實(shí)驗(yàn)用1μmol/L的地塞

9、米松誘導(dǎo)建立了 P-gp高表達(dá)的 MDCK細(xì)胞，采用UPLC-MS/MS法測(cè)定計(jì)算200μmol·L-1曲克蘆丁及類似物在P-gp高表達(dá)的MDCK細(xì)胞模型中的表觀滲透系數(shù)（Papp）及外排率（ER），并考察 P-gp抑制劑對(duì)曲克蘆丁及類似物吸收的影響。結(jié)果顯示：地塞米松能顯著促進(jìn)MDCK細(xì)胞內(nèi)羅丹明-123的外排，表示其上調(diào)了MDCK細(xì)胞上的P-gp的功能，可用于建立 P-gp高表達(dá)的 MDCK細(xì)胞；在P-gp高表達(dá)的 MDCK細(xì)胞的轉(zhuǎn)

10、運(yùn)過(guò)程中，曲克蘆丁及類似物從AP到BL的Papp分別為（1.49±0.10）×10-7cm·s-1、（1.35±0.08）×10-7cm·s-1、（1.09±0.07）×10-7cm·s-1，從 BL到 AP的 Papp分別（1.82±0.07）×10-7cm·s-1、（1.77±0.08）×10-7cm·s-1、（1.55±0.13）×10-7cm·s-1，外排率分別為1.22±0.05、1.32±0.09、1.42±0.06，在加入

11、 P-gp抑制劑維拉帕米后，曲克蘆丁及類似物從 AP到 BL的 Papp有顯著提高（P＜0.01）分別為（1.97±0.11）×10-7cm·s-1、（1.76±0.09）×10-7cm·s-1、（1.54±0.04）×10-7cm·s-1，從BL到AP的Papp分別為（1.79±0.07）×10-7cm·s-1、（1.66±0.07）×10-7cm·s-1、（1.40±0.10）×10-7cm·s-1有降低趨勢(shì)，外排率顯著降低（P＜0