間斷性缺氧對大鼠舌下神經(jīng)核形態(tài)學(xué)及電生理特性的影響.pdf

1、目的:觀察不同時間階段間斷性缺氧對大鼠舌下神經(jīng)核團(tuán)形態(tài)學(xué)及電生理特性的影響。
　　方法:將40只雄性SD大鼠隨機分為間斷性缺氧組及對照組。其中，間斷性缺氧組30只，對照組10只。間斷性缺氧組包含間斷性缺氧4周組（IH4組）、間斷性缺氧8周組（IH8組）、間斷性缺氧12周組（IH12組）三個亞組。每組各10只大鼠。實驗期間，實驗者將IH4組、IH8組、IH12組置于間斷性缺氧箱，向間斷性缺氧艙內(nèi)循環(huán)充入氮氣，通過控氧儀監(jiān)測間斷性缺氧

2、艙內(nèi)的氧濃度來程控輸氣和排氣裝置，使每次循環(huán)間斷性缺氧艙內(nèi)的氧濃度最低達(dá)到5％，隨后排出氮氣的同時吸入空氣，使間斷性缺氧箱內(nèi)的氧濃度恢復(fù)到21％。每次循環(huán)為8分鐘，氧濃度波動于5％～21％之間，每日間斷性缺氧8小時。對照組（UC組）置于正常氧環(huán)境，其余飼養(yǎng)條件同間斷性缺氧組。為排除年齡因素對實驗的影響，實驗開始及開始后第4周、第8周，分別將10只大鼠進(jìn)行間斷性缺氧處理，于實驗開始后第12周分別獲得同一周齡間斷性缺氧4周（IH4組）、8周

3、(IH8組)、12周（IH12組）的模型大鼠。實驗開始后第12周，在對照組及完成最后一次間斷性缺氧的各IH亞組，分別隨機取8只大鼠，麻醉后解剖并游離舌下神經(jīng)。將舌下神經(jīng)置于雙極銀電極上，使用多道生理記錄儀記錄各組大鼠舌下神經(jīng)放電活性。完成放電活性測定后，取大鼠的延髓，固定包埋后連續(xù)切片。每隔5張切片選取3張分別裱片于不同的玻片，此過程循環(huán)反復(fù)，將每一延髓組織塊制成3套切片。每套切片依次序分別予以編號。同一延髓組織塊制成的3套切片中，編號

4、相同的玻片處于相鄰的延髓平面。將每一延髓組織塊制成的3套切片分別進(jìn)行HE染色、Nissl染色及TUNEL檢測。光鏡下，對照大鼠腦立體定位圖譜挑選包含舌下神經(jīng)核團(tuán)的腦切片，定位舌下神經(jīng)核團(tuán)。觀察處于同一平面的舌下神經(jīng)核形態(tài)學(xué)改變及細(xì)胞凋亡情況。各組另取2只大鼠，通過光鏡定位舌下神經(jīng)核團(tuán)后，使用透射電鏡觀察舌下神經(jīng)核神經(jīng)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變;
　　結(jié)果:(1)、IH4組、IH8組、IH12組大鼠舌下神經(jīng)放電活性均較UC組增高，差異有統(tǒng)計

5、學(xué)意義(P＜0.001)。IH12組大鼠舌下神經(jīng)放電活性較IH4組及IH8組顯著減弱，但仍明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。SD大鼠經(jīng)IH長期刺激后，舌下神經(jīng)放電活性呈現(xiàn)出先升高后降低的雙相變化過程。
　　(2)、HE染色發(fā)現(xiàn)，IH4組、IH8組、IH12組大鼠舌下神經(jīng)核內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞均表現(xiàn)出不同程度的變性、損傷。隨著IH處理時間持續(xù)延長，神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目逐漸減少，體積縮小，部分神經(jīng)元結(jié)構(gòu)崩解。細(xì)胞核皺縮、消失，染色質(zhì)凝

6、集、邊聚，甚至有細(xì)胞核的溶解消失等現(xiàn)象。
　　(3)、尼氏染色發(fā)現(xiàn)，IH4組、IH8組、IH12組大鼠延髓舌下神經(jīng)核神經(jīng)元均出現(xiàn)尼氏體減少、著色變淺。隨著IH處理時間的持續(xù)延長，胞體腫脹明顯，脫失嚴(yán)重，形態(tài)出現(xiàn)不規(guī)則。胞漿尼氏體數(shù)量減少，著色淺淡或空染。細(xì)胞核出現(xiàn)固縮、偏移，核仁不清楚。尼氏染色陽性細(xì)胞計數(shù)逐漸減少，各IH組與對照組比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(34.50±2.45,24.63±2.07,19.88±2.64 VS45.

7、13±1.86,P＜0.001，n=8)。
　　(4)、TUNEL檢測發(fā)現(xiàn)，IH4組、IH8組、IH12組大鼠舌下神經(jīng)核內(nèi)神經(jīng)細(xì)胞均發(fā)生細(xì)胞凋亡，各IH組凋亡率與對照組比較差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(7.26±0.33，10.42±0.84，8.32±0.50 VS1.30±0.01，P＜0.001，n=8)。且隨著間斷性缺氧處理時間的延長，凋亡率不斷增加。在本實驗中，間斷性缺氧8周時（IH8組）凋亡率達(dá)到高峰。
　　(5)、透射