新西蘭兔OSAHS模型建立及舌下神經(jīng)傳導(dǎo)性的研究.pdf

1、研究背景及目的：
　　 建立穩(wěn)定、可靠的阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征動(dòng)物模型，是研究該疾病發(fā)生、發(fā)展的前提和重要手段，現(xiàn)在國(guó)內(nèi)外對(duì)睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（obstructive sleep apnea-hyperpnoea syndrome, OSAHS）的動(dòng)物模型還有待探索研究，這是因?yàn)镺SAHS發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，同時(shí)最易發(fā)生阻塞的舌咽區(qū)解剖形態(tài)復(fù)雜多變，局部氣道形態(tài)與睡眠時(shí)相和體位、上氣道開(kāi)放肌群神經(jīng)肌肉功能狀態(tài)、中樞呼

2、吸驅(qū)動(dòng)和調(diào)控等相關(guān)，很難從病因?qū)W、形態(tài)學(xué)上獲得模擬。
　　 目前國(guó)內(nèi)外主要的建模方法有兩種：第一種針對(duì)大動(dòng)物，切開(kāi)氣管，植入瓣膜，控制瓣膜的開(kāi)放。該方法的主要缺陷是易導(dǎo)致下呼吸道的梗阻，動(dòng)物建模的死亡率很高；第二種針對(duì)小動(dòng)物，用低壓氧艙給以缺氧環(huán)境，這只能模擬OSAHS的血氧飽和度的變化，建立全身間歇性缺氧的動(dòng)物模型，建立的不是阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣模型；還有學(xué)者希望找到天然的OSAHS動(dòng)物，比如英國(guó)的牛頭犬和中國(guó)的陸川豬都是

3、天然的OSAHS動(dòng)物，但是這些出生就發(fā)生睡眠呼吸暫停的動(dòng)物在正常的日間活動(dòng)中也存在呼吸暫停，它們自身是否存在特殊的代償機(jī)制也尚未被證實(shí)。
　　 二甲基硅油是一種具有很強(qiáng)生物安全性的凝膠狀物質(zhì)，我們?cè)O(shè)想通在CT輔助導(dǎo)航下行動(dòng)物舌咽氣道旁的間隙注射此種凝膠，造成上氣道狹窄。形成睡眠呼吸暫停或低通氣綜合征的OSAHS的動(dòng)物模型。
　　 在OSAHS的疾病發(fā)展過(guò)程中，始終伴隨著神經(jīng)功能的改變。舌下神經(jīng)及頦舌肌作為維持上氣道開(kāi)放的

4、神經(jīng)肌肉，它們?cè)贠SAHS的發(fā)生發(fā)展中存在著損傷的病理變化，損傷又將導(dǎo)致OSAHS的進(jìn)一步的嚴(yán)重，由于本實(shí)驗(yàn)的局部注射藥物生物安全性高；注射方法對(duì)神經(jīng)的損傷較小，在本實(shí)驗(yàn)中我們有安全性研究部分，所以能排除手術(shù)注射凝膠及手術(shù)方法對(duì)神經(jīng)的損傷。OSAHS會(huì)造成上氣道開(kāi)放肌的病理和功能改變已經(jīng)被國(guó)內(nèi)外研究證實(shí)，但是否會(huì)造成舌下神經(jīng)病理生理改變尚有待研究，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)中對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行舌下神經(jīng)的病理生理、傳導(dǎo)能力進(jìn)行對(duì)比分析，其中傳導(dǎo)能力包括

5、傳導(dǎo)速度、潛伏期、傳導(dǎo)波幅。期望通過(guò)第一、二、三、四周的對(duì)比研究，連續(xù)的觀(guān)察OSAHS兔的舌下神經(jīng)的變化。
　　 研究方法：
　　 1．新西蘭長(zhǎng)耳兔10只，分為實(shí)驗(yàn)組5只，對(duì)照組5只。實(shí)驗(yàn)前10只兔子行多導(dǎo)睡眠儀檢測(cè)，檢測(cè)項(xiàng)目：腦電圖、心電圖、鼾聲、口鼻氣流、血氧飽和度。實(shí)驗(yàn)組CT輔助下行上氣道周?chē)g隙二甲基硅油凝膠注射，使用20ml大針筒從兔下頜角內(nèi)側(cè)0.5cm處進(jìn)針，進(jìn)針?lè)较蛳蚯跋騼?nèi)，直達(dá)舌咽水平，注意CT定位，回抽

6、無(wú)血無(wú)氣體，即可每側(cè)2.0ml凝膠，飼養(yǎng)一個(gè)月，期間術(shù)后即刻、2周后、一月后復(fù)查多導(dǎo)睡眠圖。主要以平均血氧飽和度下降４％以下且AHI指數(shù)超過(guò)10為主要的建模成功標(biāo)準(zhǔn)。
　　 2．通過(guò)上述方法建模成功后，每隔一周舌下神經(jīng)傳導(dǎo)能力檢查，檢測(cè)包括實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每次電生理檢測(cè)結(jié)束后處死動(dòng)物，電生理檢測(cè)使用肌電圖儀，檢測(cè)內(nèi)容包括對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組舌下神經(jīng)的傳導(dǎo)速度、潛伏期、傳導(dǎo)振幅。處死動(dòng)物后取舌下神經(jīng)行HE染色觀(guān)察神經(jīng)的病理變化。對(duì)照組行

7、相同處理。
　　 3．在術(shù)前、術(shù)后一周、術(shù)后一月取二甲基硅油附近區(qū)域的舌下神經(jīng)行HE病理切片檢查，觀(guān)察神經(jīng)的不同時(shí)間段的變化，是否存在急性炎癥反應(yīng)，同時(shí)觀(guān)察局部粘膜的反應(yīng)，一月時(shí)注意觀(guān)察兔子是否存在躁狂等行為異常。
　　 結(jié)果：
　　 1. 手術(shù)后及1月后復(fù)查多導(dǎo)睡眠圖，實(shí)驗(yàn)組與術(shù)前自身、對(duì)照組相比有明顯的睡眠呼吸暫停，AHI指數(shù)術(shù)前平均為2，術(shù)后兩周達(dá)18，術(shù)后一月達(dá)22；平均血氧飽和度明顯下降，術(shù)前維持在98

8、％左右，術(shù)后兩周為88％左右，術(shù)后一月為87％左右。（p<0.05），CT檢查結(jié)果：在上氣道周?chē)?，咽旁間隙內(nèi)見(jiàn)團(tuán)塊狀密度增高影像，環(huán)狀軟骨區(qū)域氣道面積明顯減小。
　　 2．舌下神經(jīng)一周內(nèi)無(wú)明顯變化，自第三周后出現(xiàn)神經(jīng)脫髓鞘變化，并逐漸加重。在傳導(dǎo)性能方面，舌下神經(jīng)傳導(dǎo)速度變慢；潛伏期延長(zhǎng)；振幅強(qiáng)度逐漸減弱，其中神經(jīng)的傳導(dǎo)速度一月后下降約50％，潛伏期延長(zhǎng)約1.5倍，振幅下降約50％。
　　 3．對(duì)二甲基硅油凝膠的安全性檢

9、測(cè)，取術(shù)前的新西蘭兔和注射手術(shù)后一周實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物的舌下神經(jīng)行病理切片檢查，采用HE染色法。觀(guān)察發(fā)現(xiàn)術(shù)后一周是凝膠附近的神經(jīng)未見(jiàn)明顯組織水腫和炎癥細(xì)胞產(chǎn)生。在動(dòng)物解剖時(shí)，我們觀(guān)察到凝膠組織硬化，質(zhì)地堅(jiān)韌，但與周?chē)M織未見(jiàn)界限尚清楚，動(dòng)物舌咽區(qū)的間隙內(nèi)無(wú)組織壞死。
　　 結(jié)論：
　　 1. 二甲基硅油口外注射法建立的新西蘭兔子阻塞性睡眠呼吸暫停模型可靠、操作性好，與上氣道阻塞狀態(tài)接近，可進(jìn)行動(dòng)態(tài)的研究，可廣泛應(yīng)用于睡眠呼吸暫停