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1、越來(lái)越多的研究表明下丘腦室旁核(PVH)參與免疫功能的調(diào)控。PVH可以通過(guò)神經(jīng)及體液的聯(lián)系與免疫系統(tǒng)相互聯(lián)系,但PVH與淋巴結(jié)之間是否有直接的神經(jīng)環(huán)路聯(lián)系卻未見(jiàn)報(bào)道。外周免疫信號(hào)可觸發(fā)PVH神經(jīng)元內(nèi)部一些信號(hào)傳導(dǎo)分子表達(dá),但有關(guān)信號(hào)傳導(dǎo)途徑卻未完全闡明。本文以LPS刺激大鼠作為免疫激發(fā)狀態(tài)動(dòng)物模型,對(duì)此進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。 本文包括三個(gè)部分:1.采用假狂犬病毒(PRV)跨神經(jīng)元追蹤方法研究腸系膜淋巴結(jié)注射PRV大鼠PVH內(nèi)
2、PRV感染神經(jīng)元的分布,同時(shí)采用免疫組化方法研究腹腔注射細(xì)菌脂多糖(LPS)后大鼠PVH c-fos表達(dá)的變化。此部分工作旨在了解PVH是否通過(guò)與淋巴結(jié)間直接的神經(jīng)環(huán)路聯(lián)系對(duì)免疫功能進(jìn)行調(diào)控。2.采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR),免疫組織化學(xué)(單標(biāo))方法研究LPS注射后PVH內(nèi)nNOS和IEGs(FOS和JUN)的表達(dá)是否發(fā)生改變,采用免疫組織化學(xué)(雙標(biāo))方法研究nNOS和IEGs之間是否有相互的聯(lián)系。3.采用放射免疫分析方法研
3、究LPS對(duì)大鼠外周血及下丘腦中TNF-α的表達(dá)的影響,采用原位雜交方法研究LPS對(duì)大鼠下丘腦室旁核內(nèi)NF-κB表達(dá)的影響。第二、三部分工作旨在了解外周的免疫信號(hào)到達(dá)下丘腦室旁核后通過(guò)何種信號(hào)分子及信號(hào)傳導(dǎo)途徑激活下丘腦室旁核神經(jīng)元從而調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫應(yīng)答。 研究結(jié)果發(fā)現(xiàn): 1.腸系膜淋巴結(jié)注射PRV96小時(shí)后在PVH內(nèi)觀察到被PRV標(biāo)記的 陽(yáng)性神經(jīng)元,這些神經(jīng)元分布在腹腔注射LPS后PVH內(nèi)FOS陽(yáng)性 細(xì)胞數(shù)目增多的區(qū)
4、域內(nèi)。此結(jié)果提示:PVH與淋巴結(jié)間存在著直 接的神經(jīng)環(huán)路聯(lián)系。PVH可能通過(guò)直接的神經(jīng)環(huán)路聯(lián)系對(duì)淋巴結(jié) 的免疫功能進(jìn)行調(diào)控,成為免疫與腦相互聯(lián)系的重要途徑之一。 2.LPS刺激后大鼠PVH內(nèi)nNOS和nNOS mRNA的吸光度(A)值顯著增高(P<0.01,P<0.05),F(xiàn)OS與JUN陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量顯著增加(P<0.01),PVH內(nèi)部分神經(jīng)元同時(shí)表達(dá)nNOS和FOS。此結(jié)果提示:外周的免疫信號(hào)到達(dá)下丘腦室旁核后可能通過(guò)NO和
5、(或)IEGs途徑激活下丘腦室旁核神經(jīng)元,從而參與調(diào)節(jié)免疫功能。 3.LPS可使大鼠血漿及下丘腦組織中TNF-α濃度及PVH內(nèi)NF-KBmRNA的吸光度(A)值顯著增高(P<0.05,P<0.01)。此結(jié)果提示:外周的免疫信號(hào)到達(dá)下丘腦室旁核后可能通過(guò)TNF-a——NF-KB途徑激活下丘腦室旁核神經(jīng)元,從而參與調(diào)節(jié)免疫功能。 本文工作進(jìn)一步證實(shí)——PVH為免疫調(diào)節(jié)的高級(jí)整合中樞。PVH可通過(guò)直接的神經(jīng)環(huán)路與免疫系統(tǒng)相互聯(lián)
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