胸腺或靜脈注射MSCs誘導(dǎo)大鼠體內(nèi)免疫調(diào)節(jié).pdf

1、目的意義：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)是一種貼壁的成纖維樣多能成體干細(xì)胞，體外實(shí)驗(yàn)顯示MSCs具有免疫抑制特性.在狒狒皮膚移植模型中，輸注體外擴(kuò)增的異基因MSCs可以延長(zhǎng)MHC不合的皮膚移植存活時(shí)間，而早期的臨床研究發(fā)現(xiàn)MSCs可用于治療難治性急性GVHD，但目前仍不清楚其在體內(nèi)外誘導(dǎo)免疫耐受的具體機(jī)制.
　　 我們的研究用大鼠MSCs經(jīng)胸腺或靜脈注射后檢測(cè)胸腺和脾臟內(nèi)T細(xì)胞表型變化，并通過異基因皮膚移植來驗(yàn)證其免疫調(diào)節(jié)作用。本

2、研究將對(duì)異基因MSCs的臨床應(yīng)用很有意義。
　　 材料和方法：首先用含血清的低糖DMEM培養(yǎng)液從成年Wistar大鼠股骨和脛骨中沖刷出骨髓，通過密度梯度離心將MSCs分離出來，經(jīng)多次傳代后逐漸純化.然后通過表型分析、成骨和成脂肪分化實(shí)驗(yàn)鑒定體外擴(kuò)增的MSCs。傳3代的MSCs經(jīng)胰蛋白酶消化后用生理鹽水懸浮。取SD大鼠為細(xì)胞移植受者，分三組，1、胸腺內(nèi)注射(2×106細(xì)胞/只)；2、外周靜脈內(nèi)注射(2×106細(xì)胞/只)；3，對(duì)照組

3、(生理鹽水0.1ml胸腺內(nèi)注射)。各組在不同時(shí)間分別取出實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胸腺和脾臟研磨成單細(xì)胞懸液通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)T細(xì)胞表型變化。細(xì)胞移植后7天進(jìn)行相同來源的異基因皮膚移植來評(píng)價(jià)其體內(nèi)免疫耐受情況。
　　 結(jié)果：大鼠骨髓來源的MSCs可以在體外培養(yǎng)擴(kuò)增，用流式細(xì)胞儀分析傳3代以后的細(xì)胞發(fā)現(xiàn)它們具有以下的免疫表型：CD106+，CD90+，而CD45-和CD34-，CD11b-。另外，在一定條件下，MSCs可以進(jìn)行成骨和成脂肪分化。流

4、式細(xì)胞儀分析MSCs移植后脾臟和胸腺內(nèi)T細(xì)胞表型，結(jié)果顯示：1、體內(nèi)注射MSCs后胸腺和脾臟CD3+CD4＋細(xì)胞數(shù)低于31％，總體呈下降趨勢(shì)，而沒有隨時(shí)間增加(P<0.01)，但是胸腺內(nèi)注射MSCs后第3天脾臟CD3+CD8＋細(xì)胞達(dá)最高62±5％(P<0.01)。2、胸腺或外周注射MSCs后1周內(nèi)體內(nèi)CD4+CD25＋，CD4+CD25hi細(xì)胞及胸腺CD8+CD28-細(xì)胞均高于對(duì)照組(P<0.01)。3、胸腺內(nèi)注射MSCs體內(nèi)CD4＋C

5、D8+細(xì)胞隨時(shí)間逐漸增加(P<0.01)，而外周注射則導(dǎo)致其隨時(shí)間逐漸減少(P<0.01)。4、單獨(dú)注射MSCs并不能在體內(nèi)誘導(dǎo)移植物長(zhǎng)期耐受.胸腺內(nèi)注射MSCs后異基因皮膚移植物存活最短(n=8，5.5±0.8天，P<.0001)，并且在排斥部位發(fā)現(xiàn)CD8＋細(xì)胞浸潤(rùn)，然而靜脈注射MSCs后皮膚移植物存活時(shí)間則較對(duì)照組延長(zhǎng)(n=8，10±0.7天Vs8.3±0.9天，P<.0001)，同時(shí)伴有移植物中CD3＋細(xì)胞浸潤(rùn)減輕。
　　

6、 結(jié)論：異基因大鼠MSCs體內(nèi)輸注不能誘導(dǎo)CD3＋CD4＋細(xì)胞增殖，而胸腺內(nèi)注射則能引起脾臟CD3+CD8+細(xì)胞增殖伴有皮膚移植物浸潤(rùn)，導(dǎo)致異基因皮膚移植物更早被排斥。盡管我們的研究還發(fā)現(xiàn)體內(nèi)應(yīng)用MSCs也能誘導(dǎo)CD4+CD25+和CD8+CD28-Treg增殖，但不足以誘導(dǎo)長(zhǎng)期耐受。另外胸腺內(nèi)注射MSCs可以促進(jìn)體內(nèi)CD4+CD8+細(xì)胞產(chǎn)生，進(jìn)一步證實(shí)了MSCs參與胸腺內(nèi)T細(xì)胞生成。本文結(jié)果將為進(jìn)一步闡明MSCs體內(nèi)免疫調(diào)節(jié)機(jī)制提出新