裸鼠原位肝癌耐藥模型的建立、影像學(xué)檢測(cè)和mdrl-cDNA的全克隆及pc-MDR1質(zhì)粒的構(gòu)建.pdf

1、華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文裸鼠原位肝癌耐藥模型的建立、影像學(xué)檢測(cè)和mdrlcDNA的全克隆及pcMDR1質(zhì)粒的構(gòu)建姓名：韓宇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：普通外科指導(dǎo)教師：陳孝平2002.5.1華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士論文導(dǎo)時(shí)間又進(jìn)一步縮短至14天，另一方面為研究mdrl基因的調(diào)控奠定了很好的基礎(chǔ)。裸鼠原位肝癌耐藥模型的建立目的建立裸鼠原位肝癌耐藥模型，通過腹腔間歇化療誘導(dǎo)腫瘤產(chǎn)生耐藥。方法培養(yǎng)肝癌細(xì)胞系HepG2，建立裸鼠的皮下腫

2、瘤模型，形成“供瘤鼠”。開腹直視下將瘤塊種植于裸鼠的肝包膜下建立原位肝癌模型，通過表阿霉素間歇腹腔化療，建立裸鼠原位肝癌耐藥模型。用體檢、B超、CT、剖腹探查監(jiān)測(cè)肝內(nèi)瘤塊生長(zhǎng)情況。用逆轉(zhuǎn)錄聚和酶鏈反應(yīng)(RT—PCR)和單克隆抗體為JSB1的鏈霉親和素生物素技術(shù)(SP法)檢測(cè)腫瘤耐藥基因mdrlmRNA和P—gp蛋白的表達(dá)。結(jié)果1模型建立手術(shù)死亡率為0％(0／25)，腫瘤生長(zhǎng)潛伏期為5～7天，裸鼠荷瘤生存期為4914天，術(shù)后轉(zhuǎn)移率10％(

3、2／20)。種植成瘤率為90％(22／25)，補(bǔ)種成瘤率為100％(3／3)，耐藥誘導(dǎo)成功率為80％(16／20)。2誘導(dǎo)組mdrlmRNA和P—gP蛋白的表達(dá)均明顯高于對(duì)照組，分別是對(duì)照組的23倍和13倍。結(jié)論成功地建立了與臨床肝癌相似的裸鼠原位肝癌耐藥模型，誘導(dǎo)時(shí)間由經(jīng)典方法的6個(gè)月縮短至2個(gè)月，并且是在體內(nèi)肝原位誘導(dǎo)腫瘤逐步耐藥，更好的模擬了臨床腫瘤獲得性耐藥的產(chǎn)生過程。為進(jìn)一步研究肝癌多藥耐藥基因的診斷和逆轉(zhuǎn)提供了良好的動(dòng)物平臺(tái)