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文檔簡介
1、山東大學(xué)博士學(xué)位論文人膽囊癌裸鼠原位模型的建立、單克隆細(xì)胞株的分離及雙自殺基因體內(nèi)外殺傷作用的研究姓名:常新忠申請學(xué)位級別:博士專業(yè):外科學(xué)(普外)指導(dǎo)教師:王占民20040406山東人掌博,J學(xué)位論艾人膽囊癌裸鼠原位模型的建立、單克隆細(xì)胞株的分離及雙自殺基因體內(nèi)外殺傷作用的研究研究生常新忠導(dǎo)師王占民教授中文摘要第一部分:人膽囊癌裸鼠原位移植瘤模型的建立目的利用組織塊法建立技術(shù)較為成熟的人膽囊癌裸鼠原位移植瘤模型,了解其生長特點(diǎn)、鏡下形
2、態(tài)、超微結(jié)構(gòu)、染色體分析及腫瘤標(biāo)志物的表達(dá)等生物學(xué)特性,同時(shí)利用免疫組化法檢測瘤組織中一些與侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)的蛋白表達(dá)。材料和方法人膽囊癌細(xì)胞GBC—SD培養(yǎng)于加入10%新生牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中,胰酶消化后將約2106(O2m1)個(gè)GBCSD細(xì)胞注射于裸鼠皮下成瘤,取所成腫瘤組織剪成小塊接種于裸鼠皮下,建立組織塊法皮下移植瘤模型:同時(shí)將瘤組織塊接種于膽囊,膽囊原位成瘤后取出瘤組織,同法接種于下一只裸鼠的膽囊,如此反復(fù)傳代,建立
3、原位移植瘤模型;裸鼠衰竭時(shí)處死尸解,觀察腫瘤生長和轉(zhuǎn)移情況,并取瘤組織做常規(guī)病理切片顯微鏡下觀察,做超薄切片透射電鏡觀察。sP免疫組化法檢測與轉(zhuǎn)移及侵襲相關(guān)的蛋白表達(dá),實(shí)體瘤直接法行染色體分析,取原位瘤、皮下瘤模型及『F常對照裸鼠的血清,酶聯(lián)免疫法檢測相關(guān)的腫瘤標(biāo)志物。結(jié)果人膽囊癌裸鼠組織塊法皮下移植瘤模型的成瘤率為22%,原位移植瘤模聚總的成瘤率為83%,其中第代成瘤率57%,第二代成瘤率67%,第三代成瘤率83%,第四代、第五代及第
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