裸鼠小肝綜合征模型的建立和肝細(xì)胞再生特點.pdf

1、目的:通過肝大部切除術(shù)建立裸鼠小肝綜合征模型。通過生存曲線、肝功能檢測、肝臟活檢及病理學(xué)檢測，對模型進(jìn)行評價。探討小肝綜合征模型建立的方法、可行性、條件及其肝細(xì)胞再生特性。
　　方法:先取10只裸鼠進(jìn)行肝臟解剖，對其進(jìn)行在體及離體肝臟解剖學(xué)觀察。了解肝臟解剖結(jié)構(gòu)、裸鼠肝臟與體重的百分比和各肝葉占肝臟的比重。制定肝葉切除方法，熟練肝大部切除術(shù)。將40只幼齡裸鼠（5周齡，體重22.3±1.8g）隨機(jī)分為4組，每組10只，進(jìn)行不同比例的

2、肝部分切除術(shù)。分別為組1:切除25％肝組織;組2:切除50％肝組織;組3:切除75％肝組織;組4:切除80％肝組織。觀察裸鼠術(shù)后的生存狀況、生存時間(d），統(tǒng)計其生存曲線;手術(shù)前1h和手術(shù)后1、4、7、14、21、28d各組裸鼠經(jīng)心臟穿刺取血0.1ml，測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alaninetransaminase，ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase，AST)、總膽紅素(total bilirubin

3、，TBIL)、白蛋白(albumin，ALB)值。術(shù)中切除的正常肝組織及手術(shù)后2、7、28、60d時行裸鼠肝組織活檢（死亡裸鼠及時尸解和肝組織標(biāo)本取檢），行蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin andeosin stain，HE染色)、病理組織學(xué)光鏡觀察;同時，標(biāo)本行肝細(xì)胞生長因子(hepatocyte growth factor，HGF)、白介素-6(interleukin-6，IL-6)的免疫組化檢測。組間數(shù)據(jù)的比較采用重復(fù)測

4、量方差分析，檢驗水準(zhǔn)a=0.05，P＜0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:①裸鼠肝臟大致分為六葉，約占體重的（3.63±0.05）％，其中左葉占肝臟比例為（38.44±0.41）％，中葉占（26.44±0.59）％，三角葉占（14.08±0.33）％，尾狀葉占(11.84±0.53)％，右上葉占(3.49±0.28)％，右下葉占（5.71±0.22）％。②組1、2、3、4裸鼠術(shù)后60d存活率分別為100％、100％、70％和20％

5、。③肝組織大體觀察:術(shù)前裸鼠肝臟色澤紅潤，質(zhì)地柔軟。肝葉切除術(shù)后死亡裸鼠進(jìn)行解剖尸檢可見剩余肝臟組織色澤黃，呈淤膽狀態(tài)，不同程度的脂肪變性，淤血腫脹，體積增大，質(zhì)地較正常肝組織稍硬，腹腔可見少量腹水。術(shù)后第2d，組1、2肝組織色澤紅潤，質(zhì)地軟;組3、4術(shù)后肝組織顏色稍暗，質(zhì)地稍硬，其中組4腹腔中有少量腹水。術(shù)后第7d，組1、2肝組織紅潤，質(zhì)地柔軟，肝臟組織體積再生;組3、4可見肝臟組織顏色較之前紅潤，質(zhì)地較正常肝組織稍硬，但有部分裸鼠殘

6、留肝組織外觀有脂肪肝樣變化。術(shù)后28d可見組1、2、3、4肝臟組織體積幾乎與術(shù)前肝臟體積相等，組3、4肝臟組織顏色較之前紅潤，質(zhì)地柔軟。術(shù)后第60d處死裸鼠后切取肝臟，可見各組肝臟體積較術(shù)前明顯增大，重量較術(shù)前平均值增加，肝重占比明顯增加。④組1術(shù)前、術(shù)后ALT、AST、IBIL值無明顯變化。組2術(shù)后1d ALT、AST、IBIL均輕度升高，術(shù)后第4d逐漸下降，術(shù)后第7d成穩(wěn)定狀態(tài)。術(shù)后第1d，組3、4裸鼠ALT、AST、IBIL值均明

7、顯升高。組4 ALT達(dá)到520.42±28.35 U/L、AST447.10±56.45U/L、TBIL9.10±0.35umol/L。術(shù)后第1d，組3、4 ALB值明顯下降，組4裸鼠ALB最低，為32.42±1.83 U/L。⑤HE染色:術(shù)前所取得正常肝臟組織行HE染色示:中央靜脈清晰，肝細(xì)胞胞質(zhì)及胞核清晰，無炎細(xì)胞浸潤。組1、2術(shù)后第2d獲取的肝組織標(biāo)本HE染色顯示:中央靜脈輕度淤血，間質(zhì)稍水腫、肝細(xì)胞漿疏松，中央靜脈和肝竇輕度擴(kuò)張

8、，匯管區(qū)有少量炎細(xì)胞浸潤;術(shù)后第60d基本恢復(fù)正常肝臟組織結(jié)構(gòu)。組3術(shù)后第2d肝臟活檢HE染色示:中央靜脈中度淤血，間質(zhì)水腫，竇內(nèi)有明顯的血栓形成，散在的肝細(xì)胞壞死，少量細(xì)胞空泡化，匯管區(qū)存在較多炎細(xì)胞浸潤。術(shù)后60d可見肝竇稍擴(kuò)張，胞質(zhì)及細(xì)胞核清晰。組4術(shù)后第2d肝臟活檢HE染色示中央靜脈重度淤血、大片的肝細(xì)胞壞死。術(shù)后60d可見少許肝細(xì)胞空泡化呈氣球樣變、細(xì)胞脂肪變性，但有明顯肝細(xì)胞再生。⑥術(shù)前取得的正常的肝組織標(biāo)本中無IL-6免疫

9、陽性物表達(dá)，而組1術(shù)后肝細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)可見少量棕黃色I(xiàn)L-6免疫陽性物表達(dá);組2、3術(shù)后第2d可見少量的IL-6免疫陽性物表達(dá)，術(shù)后7d可見大量的IL-6免疫陽性物表達(dá)，術(shù)后28、60d IL-6免疫陽性物表達(dá)逐漸下降;組4術(shù)后第2、7d可見IL-6陽性表達(dá)，術(shù)后28、60d陽性表達(dá)下降，死亡的裸鼠肝組織中可見少量的IL-6免疫陽性物表達(dá)。⑦HGF在術(shù)前的正常裸鼠肝組織內(nèi)表達(dá)很少。而在術(shù)后組1裸鼠肝組織中可見HGF少量的表達(dá);組2術(shù)后第2d