體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究龍葵堿對(duì)胰腺癌的抗腫瘤作用.pdf

1、目的:龍葵堿，一種存在于馬鈴薯等茄類中的生物堿，被發(fā)現(xiàn)對(duì)多種癌細(xì)胞比如結(jié)腸癌、肝癌、黑色素瘤等有抑制其增殖及促進(jìn)其凋亡的作用。然而，龍葵堿對(duì)胰腺癌的抗腫瘤療效尚未完全評(píng)估。在這項(xiàng)研究中，我們探討了龍葵堿對(duì)人胰腺癌的影響。
　　方法:細(xì)胞軟瓊脂克隆試驗(yàn)觀察龍葵堿對(duì)胰腺癌細(xì)胞非貼壁依賴性增殖能力的影響，劃痕試驗(yàn)觀察龍葵堿對(duì)胰腺癌細(xì)胞遷徙能力的影響，Transwell法觀察龍葵堿對(duì)胰腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響，ibidi血管形成微板觀察龍葵

2、堿對(duì)不同胰腺癌細(xì)胞血管形成能力的影響，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)腫瘤相關(guān)基因MMP-2,MMP-9,VEGF,ENOS,EMMPRIN,E-cadherin和CD44mRNA變化，Western Blot檢測(cè)龍葵堿對(duì)Panc-1細(xì)胞MMP-2，MMP-9，VEGF，β-catenin，P-β-catenin，STAT，P-STAT，AKT，P-AKT，mTOR，P-mTOR，NF-KB/P65和TCF-1的蛋白表達(dá)，明膠酶譜法檢測(cè)PANC-

3、1細(xì)胞MMP-2和MMP-9的活性，免疫組化檢測(cè)裸鼠移植瘤組織中VEGF，PCNA表達(dá)的變化，western blot法檢測(cè)移植瘤組織MMP-2，MMP-9的表達(dá)。
　　結(jié)果:體外實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，龍葵堿在無(wú)毒理作用劑量下可以抑制胰腺癌細(xì)胞系PANC-1，SW1990及MIA PACA2的細(xì)胞增殖能力、侵襲和遷徙能力。腫瘤相關(guān)基因MMP-2/9、 EMMPRIN、 CD44、eNOS及E-cadherin的表達(dá)亦受到龍葵堿的明顯抑制。

4、此外，從血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF的表達(dá)及血管形成試驗(yàn)中可以觀察到龍葵堿可以抑制VEGF表達(dá)及血管形成能力。Western blotting試驗(yàn)中我們觀察到龍葵堿可以抑制信號(hào)蛋白AKT、mTOR、STAT3的磷酸化表達(dá)，促進(jìn)信號(hào)蛋白β-catenin的磷酸化表達(dá)。核轉(zhuǎn)錄蛋白NF-κB，β-catenin and TCF-1在細(xì)胞核中的表達(dá)能力亦下降。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)我們建立裸鼠荷瘤模型，腹腔給予龍葵堿5μg/g，隔天給藥持續(xù)兩周后，腫瘤體積及重量