靈芝三萜組分GLZ的體內(nèi)外抗腫瘤作用研究.pdf

1、目的：通過體內(nèi)外實驗，評價靈芝三萜組分GLZ的抗腫瘤活性，并對其抗腫瘤作用機制進行初步的探討，為研究開發(fā)靈芝抗腫瘤中藥奠定基礎(chǔ)。
　　方法：(1)采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法體外檢測GLZ對鼻咽癌腫瘤細(xì)胞的生長抑制作用。(2)建立小鼠S180實體瘤和腹水瘤兩種模型，觀察GLZ對實體瘤抑瘤率和腹水瘤生命延長率的影響，評價GLZ的小鼠體內(nèi)抗腫瘤活性。(3)建立裸小鼠HepG-2人肝癌、MDA-MB-231人乳腺癌、SW620人結(jié)腸癌

2、、HT-29人結(jié)腸癌、HCT116人結(jié)腸癌和CNE2人鼻咽癌移植瘤模型，評價GLZ在裸小鼠體內(nèi)抗腫瘤活性。(4)應(yīng)用Western blot法檢測GLZ對人鼻咽癌CNE2細(xì)胞中增殖凋亡相關(guān)信號分子的影響。(5)應(yīng)用Western blot法檢測GLZ對裸小鼠人結(jié)腸癌SW620腫瘤組織中增殖凋亡相關(guān)信號分子的影響。(6)采用Transwell小室法檢測GLZ對人肝癌細(xì)胞SMMC7721侵襲運動能力的影響；利用重組基底膜侵襲實驗檢測GLZ對

3、SMMC7721粘附能力的影響。(7)利用MTT法檢測GLZ對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV-304的增值能力的影響，采取劃痕試驗檢測GLZ對ECV304遷移能力的影響。
　　結(jié)果：(1)GLZ對人鼻咽癌高分化細(xì)胞CNE1抑制作用較弱，但對低分化細(xì)胞CNE2有一定的抑制作用，作用CNE2細(xì)胞48 h和72 h的IC50值分別是26.2μg/ml和15.8μg/ml。(2)靈芝三萜組分GLZ3個劑量組對S180實體瘤小鼠均具有一定的抑制作用

4、(P<0.05)，500 mg/kg組的瘤重抑制百分率達51.4％；對S180腹水瘤小鼠具有明顯的延長存活期作用，500 mg/kg組的生命延長率為52.0%(P<0.05)。(3)GLZ500 mg/kg，GLD500 mg/kg和GLH320 mg/kg口服每天給藥后，對裸小鼠HepG-2人肝癌移植瘤的抑制率分別達到了18.8%，11.9%，29.6%(P>0.05)；GLZ500 mg/kg口服每天給藥后，對裸小鼠CNE2人鼻炎癌

5、移植瘤的抑制率為36.6%(P<0.05)；GLZ250 mg/kg和500 mg/kg，1 g/kg3個劑量對裸小鼠SW620人結(jié)腸癌移植瘤均具有一定的抑制抑制作用，抑瘤率分別達到了49.5%，60.3%，52.6%(P<0.05)；GLH320 mg/kg口服每天給藥后對裸小鼠SW620人結(jié)腸癌移植瘤的抑制率為52.7%(P<0.05)；GLH200 mg/kg口服每天給藥后對裸小鼠SW620人結(jié)腸癌移植瘤的抑制率為44.1%(P<

6、0.05)；GLZ500 mg/kg口服每天給藥后對裸小鼠HT-29人結(jié)腸癌移植瘤的抑制率為49.4%(P<0.05)；GLZ500 mg/kg口服每天給藥后對裸小鼠HCT116人結(jié)腸癌移植瘤的抑制率為58.6%(P<0.05)；GLZ500 mg/kg口服每天給藥后對裸小鼠MDA-MB-231人乳腺癌移植瘤的抑瘤率為-14.3%(P>0.05)。(4)不同濃度的GLZ作用于CNE2細(xì)胞后，抗凋亡蛋白Bcl-2呈劑量依賴性減少，雖然總的

7、MEK、ERK蛋白表達未發(fā)生變化，但是它們的磷酸化水平受到影響，P-MEK和P-ERK呈劑量依賴性的減少，然后影響到細(xì)胞核內(nèi)的c-myc和NF-κB的表達水平。(5)不同劑量組的GLZ作用于人結(jié)腸癌SW620裸鼠移植瘤后，將瘤組織用于免疫印跡，發(fā)現(xiàn)隨著給藥劑量的增加， P-MEK的表達量逐漸減少，而Bax表達逐漸增多，并呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系。(6)經(jīng)過不同濃度(50μg/ml、100μg/ml)GLZ處理一定時間后，SMMC7721細(xì)胞的侵

8、襲能力和運動能力均低于對照組。100μg/ml GLZ的侵襲抑制率和遷移抑制率分別達到了84.4%和76.0%(P<0.05)；150μg/ml GLZ對SMMC7721的粘附抑制率為62.2%(P<0.05)。(7)GLZ能一定程度抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV-304的增值，作用48h后的IC50值為61.13μg/ml；人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞ECV304在經(jīng)過100μg/ml GLZ處理后，細(xì)胞的運動能力得到一定程度的下降。
　　結(jié)論

9、：(1)靈芝三萜組分 GLZ對人鼻咽癌高分化細(xì)胞CNE1抑制作用較弱，而對低分化細(xì)胞CNE2有一定的抑制作用。(2)GLZ對小鼠肉瘤S180的生長有一定的抑制作用。(3)裸鼠移植瘤實驗表明：口服給予GLZ干預(yù)后，對裸小鼠HepG-2人肝癌、SW620人結(jié)腸癌、HT-29人結(jié)腸癌、CNE2人鼻咽癌、HCT116人結(jié)腸癌細(xì)胞的生長，均起到了一定的抑瘤效果，而對MDA-MB-231人乳腺癌移植瘤的治療效果并不敏感。(4)GLZ在體外能有效抑制

10、鼻咽癌CNE2的生長并促進其凋亡，其作用機制可能是下調(diào)了MEK/ERK/c-myc、NF-κB信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，同時還下調(diào)細(xì)胞內(nèi)Bcl-2的水平。(5)GLZ在體內(nèi)能夠抑制SW620生長并促進其凋亡，其機制可能是下調(diào)了MEK/ERK/c-myc信號通路，從而影響了細(xì)胞增殖及凋亡相關(guān)蛋白的表達，最終抑制其生長。(6)GLZ能在一定程度上抑制了腫瘤細(xì)胞SMMC7721的粘附及遷移侵襲運動，可以干擾侵潤和轉(zhuǎn)移。(7)GLZ能直接抑制人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)