DNT細(xì)胞對(duì)胰腺癌體內(nèi)、外生長(zhǎng)的抑制作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、胰腺癌(Pancreatic Carcinoma,PC)是一種惡性程度極高的消化道腫瘤,由于其發(fā)生部位特殊,位于腹部深處、發(fā)病隱匿,確診時(shí)常常晚期;再加上其生物學(xué)特性具有易發(fā)生局部浸潤(rùn)(如侵犯周邊血管、淋巴結(jié)、神經(jīng)等)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的特點(diǎn),胰腺癌已經(jīng)越來(lái)越成為困擾人類健康甚至威脅生命的殺手。近年來(lái)胰腺癌發(fā)病率與死亡率逐年增高,怎樣提高早期診斷與有效治療越來(lái)越成為臨床研究的重點(diǎn)。近幾年,隨著免疫學(xué)的不斷發(fā)展,一些腫瘤學(xué)家開(kāi)始把免疫療法作為治療

2、癌癥的新方法。其中CD4-CD8-T(double negative T cell,DNT)細(xì)胞作為一種特殊的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞,在正常人的外周血約占總淋巴細(xì)胞含量的1-5％,該細(xì)胞表面表達(dá)Fas/FasL、TNF/TNFR,CD3+、CD4-、CD8-、MHCⅠ等表型。研究表明DNT細(xì)胞在免疫調(diào)節(jié)、免疫抑制、自身免疫及抗腫瘤方面發(fā)揮重要作用。
　　本研究通過(guò)從人外周血中分離、擴(kuò)增DNT細(xì)胞,使用流式細(xì)胞儀實(shí)驗(yàn)方法定性,利用MTT及裸鼠

3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)從體內(nèi)、體外兩方面驗(yàn)證DNT細(xì)胞對(duì)人胰腺癌細(xì)胞的抑制作用;同時(shí)通過(guò)PCR技術(shù),探索DNT細(xì)胞抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用機(jī)制,為利用免疫學(xué)手段治療胰腺癌奠定基礎(chǔ)。
　　目的:
　　探討CD4-CD8-double negative T(DNT)細(xì)胞對(duì)體內(nèi)、外胰腺癌生長(zhǎng)的抑制效應(yīng)及其作用機(jī)制,為利用免疫學(xué)手段治療胰腺癌提供理論實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　利用抗體吸附法從人外周血分離、擴(kuò)增、培養(yǎng)DNT細(xì)胞。采用四甲

4、基偶氮唑鹽法檢測(cè)DNT細(xì)胞對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)anc-1生長(zhǎng)的影響。將18只裸鼠隨機(jī)分成3組,其中前兩組皮下注射Panc-1細(xì)胞以建立荷瘤鼠人胰腺癌皮下移植瘤模型,第3組注射DNT與Panc-1細(xì)胞按數(shù)量5:1共培養(yǎng)后的混細(xì)胞懸液。前兩組待成瘤后,再隨機(jī)分為對(duì)照組和治療組。對(duì)照組每日給予等量蒸餾水口服,治療組予塞來(lái)昔布4 mg/d口服。每2周測(cè)量裸鼠腫瘤體積一次,描繪腫瘤生長(zhǎng)曲線。治療結(jié)束后處死裸鼠,剝除瘤組織,測(cè)量腫瘤體積并計(jì)算抑瘤率。

5、通過(guò)PCR途徑檢測(cè)DNT細(xì)胞作用于胰腺癌細(xì)胞后,胰腺癌細(xì)胞表面Fas/FasL基因的變化。
　　結(jié)果:
　　(1)四甲基偶氮唑鹽結(jié)果顯示:DNT細(xì)胞能在體外抑制人胰腺癌細(xì)胞株P(guān)anc-1的生長(zhǎng),且DNT細(xì)胞對(duì)胰腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制呈劑量依賴性;
　　(2)DNT細(xì)胞能夠干預(yù)人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng);
　　(3)PCR結(jié)果顯示:Fas基因表達(dá)上調(diào)、FasL基因表達(dá)下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　DNT細(xì)胞能夠