電針內(nèi)關(guān)穴對氟哌利多處理大鼠QTc間期和心肌Cx43表達(dá)的影響.pdf

1、背景:氟哌利多是臨床麻醉中常用的丁酰苯類藥物，主要對中樞神經(jīng)邊緣系統(tǒng)、下丘腦、黑質(zhì)和紋狀體等部位的多巴胺受體產(chǎn)生阻斷作用，因而具有強(qiáng)大的神經(jīng)安定和鎮(zhèn)吐作用，可與芬太尼合用于神經(jīng)安定麻醉或小劑量單獨(dú)用于惡心嘔吐的防治。但美國食品藥品監(jiān)督管理局(Food and Drug Administration，F(xiàn)DA)于2001年，基于多起使用氟哌利多出現(xiàn)尖端扭轉(zhuǎn)性室速猝死的病例，對其提出黑框警告，限制了氟哌利多的臨床使用，但很多麻醉學(xué)者認(rèn)為長期的

2、臨床麻醉實踐了證實小劑量氟哌利多的安全性，其優(yōu)良的止吐效果和低廉的價格優(yōu)勢使得目前尚無最佳的可替代藥物，而FDA這一行為有失公允，在麻醉學(xué)界產(chǎn)生了廣泛的爭議。電針麻醉曾廣泛用于臨床實踐并取得良好的效果，也是現(xiàn)代麻醉學(xué)對中華傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的重要應(yīng)用和發(fā)展。近年來，電針廣泛用于防治麻醉相關(guān)的不良反應(yīng)，如惡心嘔吐、缺血再灌注損傷和臟器功能不全等，在國際麻醉學(xué)研究中也有所報道，并越來越受重視。尤其是電針內(nèi)關(guān)穴能產(chǎn)生較好的止吐效果，有研究還提示電針內(nèi)關(guān)

3、具有心血管保護(hù)和抗心律失常作用，而電針內(nèi)關(guān)穴是否能減輕氟哌利多誘發(fā)的QT間期延長，尚缺乏相關(guān)研究。通過研究相關(guān)機(jī)制可以為臨床麻醉使用電針提供理論支持，也有助于研究電針對相關(guān)藥物的心臟毒性保護(hù)作用并推動電針在麻醉學(xué)中的應(yīng)用，有重要的科研價值和社會意義，并有助于節(jié)約和降低醫(yī)療費(fèi)用?？p隙連接蛋白是存在于相鄰心肌細(xì)胞間的一種重要的膜通道蛋白，它參與了心肌細(xì)胞的電和化學(xué)信號的傳導(dǎo)，并通過調(diào)控離子交換影響心肌細(xì)胞間的電偶聯(lián)和機(jī)械收縮偶聯(lián)?？p隙連接蛋

4、白是由兩個對稱的連接子組成，每個連接子由連接蛋白的六聚體結(jié)構(gòu)形成。心肌中最為重要的連接蛋白是縫隙連接蛋白43(connexin43，Cx43)，主要位于心肌細(xì)胞間的閏盤部位。相關(guān)文獻(xiàn)認(rèn)為Cx43密切參與了QT間期的形成，并對QT間期延長產(chǎn)生重要影響。心肌中Cx43蛋白的數(shù)量和分布變化會改變心肌細(xì)胞的電偶聯(lián)狀態(tài)，Cx43蛋白減少會降低心肌細(xì)胞電傳導(dǎo)的均質(zhì)性，心肌去極化和復(fù)極化時間延長，可能是QT間期延長的重要病理生理機(jī)制;而增加Cx43蛋

5、白的含量和功能則可能改善心肌細(xì)胞間電傳導(dǎo)的異質(zhì)化，減弱QT間期的延長。
　　目的:(1)觀察不同劑量的氟哌利多和電針內(nèi)關(guān)穴預(yù)處理對大鼠QT間期的影響。(2)研究不同劑量的氟哌利多和電針內(nèi)關(guān)穴預(yù)處理對大鼠Cx43mRNA和蛋白表達(dá)的影響。
　　方法:(1)動物分組:將雌性SD大鼠隨機(jī)分成正常對照組C組（8只）、小劑量氟哌利多組DL組（8只）、大劑量氟哌利多組DH組（8只）、電針對照組EC組（8只）、小劑量氟哌利多電針預(yù)處理組E

6、DL組（8只）和大劑量氟哌利多電針預(yù)處理組EDH組（8只）。C組經(jīng)股靜脈給予等量生理鹽水，DL組經(jīng)股靜脈給予氟哌利多0.13mg/kg，DH組經(jīng)股靜脈給予氟哌利多1.3mg/kg，EC組預(yù)先電針左側(cè)內(nèi)關(guān)穴30min后經(jīng)股靜脈給予等量生理鹽水，EDL組預(yù)先電針左側(cè)內(nèi)關(guān)穴30min后經(jīng)股靜脈給予氟哌利多0.13mg/kg，EDH組預(yù)先電針左側(cè)內(nèi)關(guān)穴30min后經(jīng)股靜脈給予氟哌利多1.3mg/kg。(2)使用Ⅱ?qū)?lián)監(jiān)測并記錄給藥前0min、給

7、藥后5min、10min、15min、30min、60min和120min心電圖，根據(jù)Bazett's公式QTc-B=QT/√(RR)計算大鼠QTc值。(3) RT-PCR法檢測心室肌組織中Cx43mRNA表達(dá)情況，凝膠成像分析系統(tǒng)拍攝電泳條帶，BandScan4.3軟件進(jìn)行灰度分析，將Cx43mRNA和內(nèi)參基因GAPDHmRNA的光密度比值作為Cx43mRNA的表達(dá)水平。(4)Western blotting法檢測心室肌組織中Cx43

8、蛋白的表達(dá)，并采用放射自顯影法記錄影像，凝膠成像系統(tǒng)拍攝后，使用image Pro Plus6.0軟件進(jìn)行灰度分析，計算Cx43和內(nèi)參蛋白GAPDH的光密度比值，作為Cx43蛋白的表達(dá)水平。(5)免疫組化法研究心室肌中Cx43的分布表達(dá)，心室肌組織經(jīng)固定、切片、脫蠟、抗原-抗體反應(yīng)和染色等步驟后，在光學(xué)顯微鏡40倍下觀察切片中Cx43蛋白的表達(dá)情況，取3個高表達(dá)區(qū)域400倍下拍照保存，并使用Image Pro Plus6.0軟件進(jìn)行平均

9、光密度分析。
　　結(jié)果:(1)電針內(nèi)關(guān)穴對氟哌利多處理大鼠QTc間期的影響:①與正常對照組對比，小劑量氟哌利多組在5min、10min、15min和30min各時點QTc間期顯著延長，P＜0.01差異有顯著性;大劑量氟哌利多組與正常對照組對比，在5min、10min、15min、30min、60min和120min等時點QTc間期均顯著延長，P＜0.01差異有顯著性。②電針預(yù)處理后，EDL組在給藥后5min和15minQTc值均顯

10、著低于DL組，P＜0.01差異有顯著性;10min和30min各時點的QTc間期值均顯著低于 DL組，P＜0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。③電針預(yù)處理后，EDH組在給藥后5min時QTc值顯著低于DH組，P＜0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義;10min、15min、30min和60min時點的QTc值均顯著低于DH組，P＜0.01差異有顯著性。④電針內(nèi)關(guān)穴與生理鹽水注射對照組比，QTc間期無顯著統(tǒng)計學(xué)差異。(2)電針內(nèi)關(guān)對Cx43mRNA表達(dá)影響，C

11、x43mRNA表達(dá)水平EC組(0.92±0.03)和C組(0.84±0.02)比較，P＜0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義;EDL組(0.91±0.03)和DL組(0.84±0.02)相比較，P＜0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義; EDH組(0.73±0.02)和DH組(0.64±0.03)相比較，P＜0.05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。(3) Western blotting法檢測Cx43蛋白表達(dá)水平，EC組(1.46±0.15)和C組(1.09±0.08)比較

12、，P＜0.01差異有顯著性;EDL組(1.57±0.16)和DL組(1.09±0.10)相比較，P＜0.01，差異有顯著性; EDH組(1.15±0.05)和DH組(0.96±0.08)相比較，P＜0.01差異有顯著性。(4)免疫組織化學(xué)染色法檢測心肌Cx43蛋白分布和表達(dá):①C組Cx43陽性部分呈深棕色密集顆粒狀分布于心肌細(xì)胞交界和閏盤處;DL組與C組類似;DH組Cx43蛋白呈淡棕黃色細(xì)顆粒狀表達(dá)，呈散在點狀分布于心肌細(xì)胞交界和閏盤處

13、;EC組中Cx43蛋白呈深棕黃色粗線狀廣泛分布于心肌細(xì)胞交界和閏盤處;EDL組Cx43呈深棕黃色顆粒狀分布于心肌細(xì)胞交界和閏盤處;EDH組心室肌中Cx43呈棕黃色顆粒狀分布于心肌細(xì)胞交界和閏盤處。②Cx43蛋白平均光密度值在EC組(0.189±0.008)，C組(0.168±0.009)，二者比較，P＜0.01差異有顯著性; Cx43蛋白平均光密度值在EDL組(0.202±0.009)，DL組(0.160±0.009)，二者比較，P＜0

14、.01差異有顯著性; Cx43蛋白平均光密度值在EDH組(0.198±0.009)，DH組(0.153±0.007)，二者比較，P＜0.01差異有顯著性。
　　結(jié)論:1.氟哌利多呈劑量依賴性導(dǎo)致大鼠QTc間期延長。2.電針內(nèi)關(guān)穴可減輕氟哌利多誘發(fā)的大鼠QTc間期延長。3.電針內(nèi)關(guān)穴可上調(diào)心肌Cx43mRNA和蛋白的表達(dá)，從而減少氟哌利多造成的心肌細(xì)胞復(fù)極過程中動作電位的異質(zhì)性，這可能是電針改善氟哌利多誘發(fā)QTc間期延長的機(jī)制之一。