HTK液改良液氮深低溫保存法對(duì)大鼠帶瓣管道活性的影響.pdf

1、目的：觀察HTK液對(duì)液氮深低溫保存法進(jìn)行改良后大鼠帶瓣管道活性的的變化并探討其作用機(jī)制。
　　方法：將SD大鼠隨機(jī)分成7組，取下主動(dòng)脈帶瓣管道，(1)對(duì)照組（control group）：帶瓣管道不經(jīng)滅菌孵育直接進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)。(2)實(shí)驗(yàn)組A：帶瓣管道置于含有RPMI1640培養(yǎng)基和抗生素的無(wú)菌標(biāo)本瓶中4℃滅菌孵育24小時(shí)。(3)實(shí)驗(yàn)組B：帶瓣管道置于含有半量RPMI1640培養(yǎng)基，半量HTK液及抗生素的無(wú)菌標(biāo)本瓶中4℃滅菌孵

2、育24小時(shí)。(4)實(shí)驗(yàn)組 C：帶瓣管道置于含有 HTK液和抗生素的無(wú)菌標(biāo)本瓶中4℃滅菌孵育24小時(shí)。(5)實(shí)驗(yàn)組D：采用實(shí)驗(yàn)組C的方法滅菌24小時(shí)后，將帶瓣管道置于含有70％ RPMI1640培養(yǎng)基+20%胎牛血清+10% DMSO的凍存液中深低溫凍存6個(gè)月。(6)實(shí)驗(yàn)組E：采用實(shí)驗(yàn)組C的方法滅菌24小時(shí)后，將帶瓣管道置于含有35%RPMI1640培養(yǎng)基+35% HTK液+20%胎牛血清+10% DMSO的凍存液中深低溫凍存6個(gè)月。(7

3、)實(shí)驗(yàn)組F：采用實(shí)驗(yàn)組C的方法滅菌24小時(shí)后，將帶瓣管道置于含有70% HTK液+20%胎牛血清+10% DMSO的凍存液中深低溫凍存6個(gè)月。對(duì)各實(shí)驗(yàn)組的帶瓣管道進(jìn)行細(xì)菌學(xué)、細(xì)胞活性、組織學(xué)檢測(cè)，并對(duì)實(shí)驗(yàn)組C、D、E、F實(shí)驗(yàn)前后α-酮戊二酸含量進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果：各實(shí)驗(yàn)組帶瓣管道均未檢出細(xì)菌及真菌。在滅菌孵育期間中，除對(duì)照組之外，實(shí)驗(yàn)組C帶瓣管道的細(xì)胞活性保存最好，細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)保存最完整，滅菌孵育期間α-酮戊二酸含量隨時(shí)間的延

4、長(zhǎng)進(jìn)行性下降。在深低溫凍存期間，各實(shí)驗(yàn)組的帶瓣管道保存效果無(wú)明顯差別。
　　結(jié)論：采用HTK液對(duì)液氮深低溫保存法進(jìn)行改良，能提高大鼠帶瓣管道在滅菌孵育期間細(xì)胞活性及細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)的保存效果。其主要機(jī)制是在滅菌孵育期間，HTK液中的組氨酸緩沖對(duì)能有效維持細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境的穩(wěn)定，色氨酸及酮戊二酸作為能量底物，對(duì)缺血狀態(tài)下的帶瓣管道提供能量。而在深低溫凍存期間，由于細(xì)胞代謝趨于停滯，HTK液的保護(hù)機(jī)制不能充分體現(xiàn)，組織的保存效果主要取決于冷