深低溫全眼球活性保存角膜的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：角膜深低溫保存技術(shù)是Capella等于1965年創(chuàng)立的單純角膜組織保存方法。該方法可使角膜內(nèi)皮細(xì)胞長(zhǎng)期處于“休眠狀態(tài)”，保存期間內(nèi)皮細(xì)胞活性不隨時(shí)間延長(zhǎng)而減弱。4℃濕房保存是一種簡(jiǎn)便的全眼球保存方法，它不易污染，便于運(yùn)送和取材，但角膜內(nèi)皮細(xì)胞活性保存時(shí)間短。將兩者優(yōu)點(diǎn)結(jié)合起來(lái)，探索一種既簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)，又確實(shí)有效的長(zhǎng)期深低溫全眼球活性保存角膜方法，以促進(jìn)眼庫(kù)保存技術(shù)的發(fā)展。 目的：探索全眼球深低溫活性保存角膜的最佳模式，研究

2、影響深低溫全眼球保存法的角膜內(nèi)皮細(xì)胞活性的因素。 方法：根據(jù)深低溫冷凍保存過(guò)程中前房?jī)?nèi)注入二甲基亞砜(DMSO)的方式，降溫速率及復(fù)溫條件的不同，將80只成年純種新西蘭兔眼球隨機(jī)分為8組，冷凍保存時(shí)間30天。另取10只新鮮兔眼做對(duì)照。通過(guò)角膜內(nèi)皮細(xì)胞活性染色方法評(píng)定各組角膜內(nèi)皮細(xì)胞存活率(ESR)及光鏡下內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)，優(yōu)選出最佳保存方法。將優(yōu)選組角膜與對(duì)照組同時(shí)進(jìn)行電鏡檢查及琥珀酸脫氫酶(SDH)組織細(xì)胞化學(xué)染色，對(duì)比觀察兩組細(xì)

3、胞的超微結(jié)構(gòu)及酶活性。 結(jié)果：評(píng)定出角膜內(nèi)皮細(xì)胞存活率最高組，為最佳凍存組，其方法如下：抽空房水，注入7.5﹪(V/V)DMS0，4℃冰箱內(nèi)冷平衡30min，其間每隔15min抽出前房?jī)?nèi)保護(hù)液后再次注入7.5﹪DMSO，共反復(fù)2次。再分段降溫，-30℃30min，-80℃30min，最后將全眼球移入-196℃液氮中保存；40℃水浴中快速?gòu)?fù)溫。該組角膜內(nèi)皮細(xì)胞存活率平均為87.53﹪，與對(duì)照組(98.20﹪)比較，結(jié)果相近，符合臨