細(xì)胞因子活化的供體淋巴細(xì)胞輸注小鼠模型的建立及其抗白血病效應(yīng)機(jī)制的初探.pdf

1、目的：建立白血病小鼠MHC相合異基因骨髓移植后復(fù)發(fā)模型、常規(guī)供體淋巴細(xì)胞輸注(tDLI)模型和細(xì)胞因子活化的供體淋巴細(xì)胞輸注(aDLI)模型，研究aDLI與tDLI的移植物抗白血病(GVL)效應(yīng)差異及其相關(guān)免疫機(jī)制。
　　 方法：建立荷EL9611(H-2d)紅白血病細(xì)胞的BALB/cH-2d小鼠接受DBA/2H-2d小鼠來源的MHC相合異基因骨髓移植(BMT)模型。移植前制備供鼠骨髓細(xì)胞(BMCs)和脾細(xì)胞(SCs)，BALB

2、/c小鼠提前7天接種1×106個(gè)EL9611白血病細(xì)胞，在X射線8Gy全身照射(TBI)后行（供鼠）DBA/2H-2d→（受鼠）BALB/cH-2d方向骨髓移植，隨機(jī)分為6個(gè)組，每組8只：A組（對照組：BMT組）：TBI后輸注供鼠來源的BMCs5×106個(gè)；B組（對照組∶單用IFN組）∶TBI后輸注供鼠來源的BMCs5×106個(gè),3天后開始予重組IFN-α20000U/d皮下注射，直至小鼠死亡；C組（tDLI組）：TBI后輸注供鼠來源的

3、BMCs5×106個(gè)+不同劑量SCs：1×107(C1組)和2×107(C2組)個(gè)：D組(aDLI組)：TBI后輸注供鼠來源的BMCs5x106+不同劑量SCs:1×107（D1組）和2×107（D2組）個(gè),3天后開始予重組IFN-α20000U/d皮下注射，直至小鼠死亡。觀察各組小鼠生存時(shí)間、白血病負(fù)荷、GVHD表現(xiàn)、組織病理學(xué)等，并通過流式細(xì)胞術(shù)比較C2組和D2組小鼠移植后外周血CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞及其活化標(biāo)志CD

4、69的表達(dá)。
　　 結(jié)果：平均存活時(shí)間A、B、C1、C2、D1和D2組分別為(11.88±1.89)d、(14.12±1.73)d、(29.63±2.00)d、(32.50±2.07)d、(36.00±9.91)d和(46.25±11.45)d，C1、C2、D1和D2組存活時(shí)間均較A、B組顯著延長(P＜0.05)，D1組較C1組、D2組較C2組小鼠存活時(shí)間均延長，其中D2組和C2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。A組和B組不出

5、現(xiàn)GVHD表現(xiàn)，C1、C2、D1和D2組出現(xiàn)不同程度弓背、翹毛、體重下降等表現(xiàn)，aGVHD臨床評分分別為1.88±0.64、2.63±0.74、2.25±0.71、3.25±0.71，其中D1組較C1組，D2組較C2組GVHD加重(P＜0.05)；皮膚、肝臟和腸道GVHD病理表現(xiàn)嚴(yán)重程度與GVHD臨床評分相符。A、B、C1、D1組小鼠全部死亡，C2組和D2組分別有1/8和3/8只小鼠長期生存，外周血涂片及組織病理顯示小鼠均因白血病死亡，

6、無aGVHD相關(guān)死亡。淋巴細(xì)胞免疫表型結(jié)果顯示：D2組較C2組小鼠外周血CD3+細(xì)胞百分比、CD3+CD8+細(xì)胞百分比升高，CD4/CD8細(xì)胞比值降低，CD8+細(xì)胞活化標(biāo)志CD69表達(dá)升高。
　　 結(jié)論：本研究建立了以荷EL9611紅白血病細(xì)胞的BALB/cH-2d小鼠為受鼠，DBA/2H-2d小鼠為供鼠的MHC相合異基因骨髓移植后復(fù)發(fā)模型，在此基礎(chǔ)上給予不同的過繼免疫治療，建立了細(xì)胞因子活化的供體淋巴細(xì)胞輸注(aDLI)模型，