多巴胺受體D5B轉(zhuǎn)基因大鼠的建立及行為學(xué)研究.pdf

1、本文克隆得到了人類多巴胺受體D5基因的一個(gè)新亞型D5B。D5B基因的序列與D5有98％同源性，與D5的兩個(gè)假基因有94％同源性。D5B基因與假基因不同，含有一個(gè)完整的開放閱讀框，能夠編碼比D5受體多一個(gè)氨基酸的蛋白。藥理學(xué)研究初步表明D5B受體與D5受體的藥理學(xué)特性不同。為了研究D5B受體的功能，建立了由CamKⅡ啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的前腦過表達(dá)D5B的轉(zhuǎn)基因大鼠。RT-PCR和Western blot分析表明D5B基因在轉(zhuǎn)基因大鼠腦部特異性表達(dá)

2、。隨后運(yùn)用行為學(xué)方法對(duì)D5B轉(zhuǎn)基因大鼠進(jìn)行了焦慮、抑郁、學(xué)習(xí)和記憶方面的表型研究，結(jié)果表明D5B基因在許多大腦功能如情緒、學(xué)習(xí)和記憶方面起到復(fù)雜的調(diào)控作用。全文內(nèi)容如下： 1.D5B基因克隆的確證。分別以SH-Sy5Y和HEK293兩種細(xì)胞提取的基因組DNA作模板進(jìn)行PCR反應(yīng)，之后將PCR產(chǎn)物克隆到T載體并測(cè)序。由測(cè)序結(jié)果分析，從42個(gè)測(cè)序克隆中得到12個(gè)含有D5B基因的克隆。 2.建立轉(zhuǎn)基因大鼠。利用CaMKⅡ啟動(dòng)子

3、構(gòu)建了前腦特異表達(dá)D5B受體的轉(zhuǎn)基因大鼠。先將D5B基因克隆入含有內(nèi)含子和SV40polyA尾巴的p265載體，再將p265-D5B片斷克隆入含有CaMKⅡ啟動(dòng)子的p279載體。轉(zhuǎn)基因大鼠通過顯微注射獲得，并用PCR和Southernblot的方法鑒定轉(zhuǎn)基因陽性。 3.D5B基因在轉(zhuǎn)基因大鼠前腦的表達(dá)分析。利用跨內(nèi)含子的引物進(jìn)行RT-PCR，結(jié)果表明轉(zhuǎn)基因大鼠的皮層和海馬均表達(dá)D5B基因。Westernblot結(jié)果表明腦部有該受

4、體蛋白表達(dá)。 4.D5B轉(zhuǎn)基因大鼠的學(xué)習(xí)記憶行為研究。采用T-maze和fearconditioning等行為學(xué)方法來評(píng)估大鼠的學(xué)習(xí)記憶行為。時(shí)間延遲交替任務(wù)T-maze實(shí)驗(yàn)表明在延遲3分鐘時(shí)轉(zhuǎn)基因大鼠的記憶能力比正常組大鼠明顯降低。Contextualfearconditioning實(shí)驗(yàn)表明轉(zhuǎn)基因大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力優(yōu)于正常組大鼠。不同結(jié)果很可能是由于不同的行為學(xué)實(shí)驗(yàn)所涉及的神經(jīng)回路不同。 5.D5B轉(zhuǎn)基因大鼠的焦慮和抑