189株肺炎鏈球菌耐藥性及耐藥機(jī)制的初步研究.pdf

1、目的：
　　1.分析189株肺炎鏈球菌對(duì)各類抗生素的耐藥狀況及特點(diǎn)，指導(dǎo)臨床合理使用抗菌藥物，防止耐藥菌株的傳播。
　　2.分析肺炎鏈球菌的PBPs基因突變情況以及探討肺炎鏈球菌β-內(nèi)酰胺類抗生素最小抑菌濃度(MIC)與PBPs變異的關(guān)系，以明確本地區(qū)肺炎鏈球菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥機(jī)制，以便能夠及時(shí)采取措施控制感染，阻止耐藥菌株的傳播。
　　方法：
　　1.收集2011年6月－2012年3月臺(tái)州地區(qū)各家醫(yī)院

2、住院患者的呼吸道、血液、腦脊液、膿液和胸水標(biāo)本中分離到的肺炎鏈球菌，采用K-B法對(duì)10種抗菌藥物進(jìn)行敏感性試驗(yàn)及E-test法檢測(cè)4種β-內(nèi)酰胺類抗生素的MIC值，比較兒童和成人、PNSP和PSSP、侵襲性和非侵襲性感染肺炎鏈球菌的藥敏結(jié)果，分析本地區(qū)肺炎鏈球菌的耐藥特點(diǎn)。
　　2.用PCR法檢測(cè)肺炎鏈球菌青霉素耐藥相關(guān)基因PBPs，并進(jìn)行基因測(cè)序。共檢測(cè)63株肺炎鏈球菌，其中青霉素敏感22株，中介8株，耐藥33株。
　　結(jié)

3、果：
　　1.189株肺炎鏈球菌的藥敏結(jié)果顯示，青霉素不敏感99株，不敏感率為52.4％，其中PRSP84株占44.5％，PISP15株占7.9％。189株肺炎鏈球菌對(duì)紅霉素、阿奇霉素、克林霉素、四環(huán)素和復(fù)方新諾明的耐藥率較高，分別為95.2％、90.5％、85.7％、79.4％和69.8％。對(duì)左旋氧氟沙星、氯霉素、頭孢噻肟、頭孢曲松的耐藥率較低，分別為1.6％、4.8％、7.9％、19.0％，其中頭孢噻肟中度敏感菌株較多，占23

4、.8％。未檢出耐萬(wàn)古霉素、利奈唑胺和莫西沙星菌株。
　　2.根據(jù)肺炎鏈球菌對(duì)青霉素的耐藥性將其分為PSSP、PISP和PRSP三組，PISP和PRSP統(tǒng)稱為PNSP。PNSP與PSSP兩組菌藥敏比較結(jié)果發(fā)現(xiàn)PNSP組對(duì)頭孢噻肟和頭孢曲松的耐藥率明顯高于PSSP組(P<0.05和P<0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。PNSP組細(xì)菌對(duì)于大環(huán)類酯類、四環(huán)素和復(fù)方新諾明的耐藥率比PSSP組高，但兩組細(xì)菌比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。<

5、br>　　3.在兒童與成人肺炎鏈球菌分離株的藥敏結(jié)果比較中，兒童分離株對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥性明顯高于成人分離株，其對(duì)青霉素、頭孢噻肟和頭孢曲松的敏感率分別為：22.9％、46.9％和57.1％；而成人分離株對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素的敏感率則相對(duì)較高，分別為78.6％、89.3％和100％。兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。兩組細(xì)菌對(duì)大環(huán)類酯類、四環(huán)素和復(fù)方新諾明耐藥性均較高，相比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。喹諾酮類藥物、氯

6、霉素敏感性均很高。
　　4.在侵襲性和非侵襲性肺炎鏈球菌抗菌藥物的活性比較中，兩者的耐藥性分析結(jié)果有很多相似之處，無(wú)明顯差別。
　　5.在PBP1a基因突變中，48株在STMK盒內(nèi)發(fā)生了Thr371→Ala/Ser替換，其中PRSP菌株均發(fā)生了此位點(diǎn)的氨基酸替換，同時(shí)伴有STMK保守序列后的387位Glu→Asp的突變。另外還發(fā)現(xiàn)了Ser351→Ala及Ile358→Thr的基因置換。有9株耐藥株和2敏感株發(fā)生了172位氨基

7、酸變異SSN→SSV。PBP2b基因檢測(cè)中，SVVK(391-394)、SSN(448-450)、KTG(620-622)3個(gè)保守區(qū)內(nèi)均未發(fā)生氨基酸替換，但所有耐藥菌株和部分敏感菌株均發(fā)生了Thr451→Ala的替換，同時(shí)伴SSN基序附近位點(diǎn)Ser478→Thr的替換，此外還發(fā)現(xiàn)Leu460→Ile，Glu481→Gly的聯(lián)合突變。13株SP在保守基序KTG區(qū)域后的出現(xiàn)Ala624→Gly突變，并同時(shí)合并PBP2b570QLQPT→AI

8、DTK的置換。在PBP2X基因的突變中，大部分耐藥菌株P(guān)BP2x基因STMK保守序列出現(xiàn)Thr338→Ala變異以及附近的氨基酸變異，如Leu364→Ile。從細(xì)菌的β-內(nèi)酰胺類藥物的MIC值可以發(fā)現(xiàn)，隨著PBPs基因序列中的突變位點(diǎn)增多，菌株對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物的MIC值也逐漸升高(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.肺炎鏈球菌臨床檢出株對(duì)大環(huán)類酯類、四環(huán)素和復(fù)方新諾明的耐藥性很強(qiáng)，對(duì)萬(wàn)古霉素、利奈唑胺、氯霉素和喹諾酮

9、類抗生素最為敏感。青霉素不敏感的肺炎鏈球菌比例較高，在PNSP菌株中，多重耐藥菌比例較高，β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥趨勢(shì)與青霉素的相似。肺炎鏈球菌兒童分離株的抗菌藥物耐藥率明顯高于成人分離株。侵襲性菌株和非侵襲性菌株的耐藥性無(wú)明顯差別。
　　2.本地區(qū)肺炎鏈球菌的主要耐藥(R)模式上，以紅霉素+復(fù)方新諾明+四環(huán)素為主，其次則為紅霉素+復(fù)方新諾明+四環(huán)素+克林霉素的耐藥模式，紅霉素+復(fù)方新諾明+四環(huán)素+克林霉素+青霉素(12.5％)比

10、例也較高。
　　3.所有耐青霉素的肺炎鏈球菌均存在不同程度的基因突變，突變位點(diǎn)主要集中在保守基序SXXK、SXN、KT/SG及其臨近氨基酸序列。肺炎鏈球菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥機(jī)制主要與PBP1a，PBP2b，PBP2x變異有關(guān)，PBP1a和PBP2x可能是在PBP2b變異的基礎(chǔ)上進(jìn)一步增加肺炎鏈球菌對(duì)β-內(nèi)酰胺類抗生素的耐藥性。
　　隨著肺炎鏈球菌株的PBP2x、PBP2b、PBP1a各位點(diǎn)的變異增多，菌株對(duì)β-內(nèi)酰胺類