IL-12恢復(fù)化療藥5-氟尿嘧啶（5-FU）抑制的T細(xì)胞免疫功能.pdf

1、目的： 進(jìn)一步探討5-FU對正常人外周血T細(xì)胞介導(dǎo)免疫應(yīng)答的抑制機(jī)制及IL-12是否能夠恢復(fù)由5-FU引起的免疫抑制功能，為臨床用藥和治療提供理論依據(jù)。 實驗材料和方法： (1)首先觀察5-FU對肝癌細(xì)胞株HepG2及正常人外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)增殖和活性的影響，找出既能抑制腫瘤生長，也能抑制免疫細(xì)胞功能的5-Fu濃度，以此濃度作為實驗

2、的作用濃度。 (2)PBMCs在anti-CD3或anti-CD3+anti-CD28刺激的條件下，加入或不加入不同濃度5-FU共同培養(yǎng)，利用EIASA法檢測培養(yǎng)上清中IFN-γ的水平。 (3)PBMCs預(yù)先加入或不加入5-FU共同培養(yǎng)后，再分別加入anti-CD3+anti-CD28刺激，利用流式細(xì)胞檢測技術(shù)分析T細(xì)胞亞群表達(dá)細(xì)胞因子IFN-γ和IL-2以及細(xì)胞活化分子CD25表達(dá)的變化。 (4)PBMCs加入

3、anti-CD3、anti-CD3+5-FU和上述兩組分別加入不同濃度的IL-12共培養(yǎng)于96孔平底培養(yǎng)板48 h后收集上清，ELISA法檢測IFN-γ。另外，PBMCs與anti-CD3或anti-CD3+5-FU于同樣條件下預(yù)處理24 h后再分別加入不同濃度IL-12，繼續(xù)培養(yǎng)，收集上清，ELISA法檢測IFN-γ。 (5)Anti-CD3+anti-CD28、IL-12、5-FU不同配伍組合與PBMCs共培養(yǎng)后收集細(xì)胞進(jìn)行

4、細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)染色。 IL-12恢復(fù)化療藥5-氟尿嘧啶(5-FU)抑制的T細(xì)胞免疫功能結(jié)果： (1)5-FU抑制肝癌細(xì)胞株HepG2的生長，同時以劑量依賴方式抑制正常人PBMCs的生長及IFN-γ的產(chǎn)生。當(dāng)5-FU濃度為10μg/ml或50μg/ml時，既能抑制腫瘤細(xì)胞株的生長，也抑制免疫細(xì)胞分泌IFN-γ。 (2)T細(xì)胞亞群分析的結(jié)果表明，5-FU抑制了CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴細(xì)胞IFN-γ和IL

5、-2的表達(dá)，同時也抑制了兩種細(xì)胞亞群細(xì)胞表面活化分子CD25的表達(dá)。 (3)5-FU預(yù)處理與否，IL-12都能在整體細(xì)胞水平上恢復(fù)T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的能力。 (4)IL-12能促進(jìn)由anti.CD3+anti-CD28誘導(dǎo)的CD4<'+>和CD8<'+>T細(xì)胞IFN-γ產(chǎn)生。與anti-CD3+anti.CD28+5-FU組相比，anti-CD3+anti-CD28+5-FU+IL-12組產(chǎn)生IFN-γ的CD4<'+>

6、和CD8<'+>T細(xì)胞百分率都升高，說明IL-12能恢復(fù)由5-FU抑制后CD4<'+>和CD8<'+>T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的能力。 結(jié)論： 本研究證明了5-FU抑制腫瘤細(xì)胞生長的同時也抑制免疫細(xì)胞的應(yīng)答，以劑量依賴方式抑制正常人PBMCs IFN-γ的產(chǎn)生。5-FU抑制CD4<'+>和CD8<'+>T淋巴細(xì)胞IFN-γ和IL-2的表達(dá)，同時也抑制PBMCs的活化。當(dāng)將IL-12加入到經(jīng)anti-CD3和5-FU作用的細(xì)胞