鉑類抗癌藥物與銅轉運蛋白C端金屬結合肽的反應機理研究.pdf

1、自從1967年Rosenberg等人發(fā)現順鉑具有抗癌療效，鉑類抗癌藥物的作用機理就一直是人們關注的重點。雖然順鉑在臨床上應用廣泛，但是接受順鉑治療的患者會出現惡心，嘔吐，聽力障礙，神經毒性等副作用，而且在治療后期會慢慢出現耐藥性。因此，克服順鉑的毒副作用以及耐藥性是眾多科學家急需解決的問題。第二代抗癌藥物卡鉑和第三代抗癌藥物奧沙利鉑的出現就是為了解決以上難題。鉑藥物的抗癌機理是非常復雜的，包括藥物的細胞攝取，與細胞內生物分子的作用，進入

2、細胞核與作用靶點DNA結合，以及如何泵出細胞。其中的每一個過程對鉑藥物的抗癌活性都有很大的影響。
　　 人類銅轉運蛋白(hCTR1)有助于順鉑的細胞攝取，并且其胞外的N端結構域已經被證明能與鉑類藥物配位。有證據表明在順鉑的細胞攝取過程中hCTR1胞內的C端肽段也起到了至關重要的作用。本論文的研究工作主要包括鉑藥物、Cu(Ⅰ)與銅轉移蛋白(hCTR1)C端肽段(C8)的作用機理。我們利用UV-vis，ESI-MS以及NMR解析了C

3、8與鉑藥物反應的速率，與Cu(Ⅰ)的結合常數，生成的產物組成，以及金屬的結合位點。
　　 第一章,主要通過調研文獻對本課題的研究背景，發(fā)展現狀，以及工作的意義做簡單的介紹。第一節(jié),主要介紹順鉑的發(fā)展歷程和其它抗癌藥物的發(fā)展狀況。第二節(jié),是關于順鉑的抗癌機理的論述，主要包括以下幾個方面:順鉑的細胞攝取，細胞內的運輸，作用靶點和泵出。第三節(jié)和第四節(jié),則分別介紹了銅轉移蛋白(hCTR1)與銅，順鉑相互作用機理的研究。第五節(jié),論述了抗癌

4、藥物的發(fā)展趨勢。
　　 第二章,主要研究了位于hCTR1細胞內的C端肽段與鉑類藥物的反應。hCTR1 C端結構域的八肽(C8:VDITEHCH)被選擇作為研究對象，實驗過程中使用了UV-vis，HPLC，ESI-MS和NMR對反應進行監(jiān)測。結果表明，C8在與順鉑和奧沙利鉑反應的過程中表現出了較高的活性，其中-HCH序列是最容易與鉑類藥物結合的位點。在C8與順鉑的反應產物中，順鉑的兩個氨配體盡管是位于巰基結合位點的對位，仍可以與鉑

5、配位超過12小時。氨的釋放要反應很長一段時間后才能發(fā)生。結合在肽上的鉑可以發(fā)生遷移，并且在這一過程中氨配體仍然與鉑保持配位狀態(tài)。這些實驗結果表明，hCTR1的C端肽段可以結合鉑類藥物，通過轉移螯合的方式將鉑藥物輸送到細胞內。
　　 第三章,是關于hCTR1細胞內的C端八肽與Cu(Ⅰ)的反應。首先，我們需要選擇合適的還原劑以保證Cu處于還原狀態(tài)。對比幾種常用的還原劑，20％的CH3CN既能保證Cu(Ⅰ)處于還原狀態(tài)，又不會與Cu(