煙堿對(duì)膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎小鼠調(diào)節(jié)作用及煙堿對(duì)體外誘導(dǎo)Th17細(xì)胞分化和功能影響的初步研究.pdf

1、近年來(lái)，有關(guān)炎性反應(yīng)受到神經(jīng)回路調(diào)控的發(fā)現(xiàn)將免疫學(xué)和神經(jīng)生物學(xué)聯(lián)系到了一起。這一發(fā)現(xiàn)的意義在于免疫系統(tǒng)將不再被認(rèn)作是一個(gè)完全自主的獨(dú)立系統(tǒng)，而這種炎癥反應(yīng)的神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控通路被稱(chēng)為膽堿抗炎癥通路。a7 nAChR，是乙酰膽堿受體家族的一個(gè)成員，它在神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛分布。該家族成員在神經(jīng)元細(xì)胞上形成同五聚體或者異五聚體受體，并作為配體控制的離子通道介導(dǎo)突觸中信號(hào)的快速傳遞。除了神經(jīng)系統(tǒng)，a7 nAChR在免疫細(xì)胞中廣泛表達(dá)，現(xiàn)已在單核、巨噬、

2、T、B淋巴細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞中證實(shí)了其存在。使用a7 nAChR的非選擇性激活劑(如nicotine)或者選擇性激活劑(如choline或GTS-21)能夠在單核和巨噬細(xì)胞中活化多個(gè)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，下調(diào)核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的活性以及TLR4的表達(dá)，并且抑制炎性因子的轉(zhuǎn)錄。
　　 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(collagen induced arthritis，CIA)模型小鼠作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停瑱z測(cè)了煙堿干預(yù)對(duì)CIA小鼠的免疫調(diào)節(jié)

3、作用。結(jié)果顯示，煙堿干預(yù)能夠有效地減緩模型小鼠關(guān)節(jié)炎病程，減輕炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、關(guān)節(jié)軟骨侵蝕等關(guān)節(jié)炎癥狀；而且流式結(jié)果顯示煙堿干預(yù)能夠降低模型小鼠脾臟中CD4+IL-17A+細(xì)胞比例(12.53％vs.7.63％)；減弱炎癥相關(guān)細(xì)胞因子IL-17A、IL-21、IL-6 mRNA的表達(dá)。并且煙堿干預(yù)能夠降低模型小鼠血漿中炎癥細(xì)胞因子TNF-a含量。
　　 同時(shí)，為了進(jìn)一步了解乙酰膽堿受體在CIA模型小鼠免疫系統(tǒng)中的作用機(jī)制，本研究檢

4、測(cè)了體外培養(yǎng)Th17細(xì)胞的乙酰膽堿受體(a7 nAChR)表達(dá)，結(jié)果顯示在所有檢測(cè)細(xì)胞中，乙酰膽堿受體(a7 nAChR)陽(yáng)性Th17細(xì)胞為8.49％，占IL-17A+細(xì)胞總數(shù)的25.64％。隨后，我們采用了抗體四聚體聯(lián)合磁珠分選方法，對(duì)Th17條件培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行了分選純化，純化后IL-17A+細(xì)胞達(dá)到58.49％。采用煙堿對(duì)純化后Th17培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行處理，流式檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)相比對(duì)照組，加入10-6M煙堿的培養(yǎng)細(xì)胞其細(xì)胞內(nèi)IL-17A熒光強(qiáng)