血吸蟲(chóng)感染誘導(dǎo)的Th免疫偏移對(duì)小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎的影響.pdf

1、目的：
　　機(jī)體接觸包括蠕蟲(chóng)在內(nèi)的病源微生物機(jī)會(huì)減少,尤其在幼年時(shí)期免疫系統(tǒng)失去病源微生物的塑造和協(xié)調(diào),是導(dǎo)致西方發(fā)達(dá)國(guó)家自身免疫性疾病和過(guò)敏性疾病發(fā)病率迅速增高的主要原因之一。蠕蟲(chóng)感染能激發(fā)強(qiáng)烈的Th2免疫應(yīng)答,可以改善Th1介導(dǎo)的自身免疫性疾病的臨床癥狀和病理過(guò)程。日益增多的流行病學(xué)及實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)了蠕蟲(chóng)對(duì)自身免疫性疾病及過(guò)敏性疾病的保護(hù)作用,顯示了優(yōu)異的臨床應(yīng)用價(jià)值。目前利用豬鞭蟲(chóng)卵治療炎癥性腸病(inflammatory b

2、owel disease,IBD)患者已取得良好的臨床效果。
　　類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis,RA)是一種嚴(yán)重危害人類健康的慢性自身免疫性疾病,該病發(fā)病率和致殘率高,目前仍無(wú)有效的治療方法。研究表明,CD4+效應(yīng)T細(xì)胞和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞免疫失衡參與RA發(fā)病的各個(gè)環(huán)節(jié),RA的致病與Th1/Th17密切相關(guān)。日本血吸蟲(chóng)感染可誘導(dǎo)強(qiáng)烈的Th2優(yōu)勢(shì)應(yīng)答。本研究試圖利用血吸蟲(chóng)感染和血吸蟲(chóng)抗原誘導(dǎo)的Th2免疫偏移來(lái)恢

3、復(fù)RA失衡的Th免疫應(yīng)答。用CIA鼠構(gòu)建血吸蟲(chóng)感染的RA模型,觀察CD4+T細(xì)胞亞群的網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié),探討RA的發(fā)病、轉(zhuǎn)歸及免疫抑制性的治療作用。為篩選特異性抑制RA過(guò)度的Th1/Th17免疫應(yīng)答的新型免疫調(diào)節(jié)劑奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　建立雄性DBA/1小鼠膠原性關(guān)節(jié)炎(Collagen Induced-arthritis,CIA)模型,分別用單、雙性日本血吸蟲(chóng)尾蚴(25±2條)于造模前2W、造模后4W(關(guān)節(jié)炎模型建立后)經(jīng)腹

4、部皮膚感染小鼠, SPF級(jí)環(huán)境飼養(yǎng),關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)價(jià)多發(fā)性關(guān)節(jié)炎病變的發(fā)生及嚴(yán)重程度。12W后處死動(dòng)物,ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測(cè)血清膠原特異IgG、IgG1、IgG2a水平,比較血吸蟲(chóng)干預(yù)對(duì)CIA鼠自身抗體形成的影響;流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,FCM)檢測(cè)脾淋巴細(xì)胞CD4+T細(xì)胞亞群,分析血吸蟲(chóng)感染對(duì)T細(xì)胞免疫應(yīng)答的作用;Real time PCR檢測(cè)

5、炎癥關(guān)節(jié)內(nèi)部細(xì)胞因子mRNA表達(dá)水平;取足爪組織觀察血吸蟲(chóng)感染對(duì)小鼠關(guān)節(jié)炎組織病理學(xué)的影響;評(píng)價(jià)血吸蟲(chóng)活蟲(chóng)感染對(duì)自身免疫性關(guān)節(jié)炎小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　結(jié)果:
　　與對(duì)照組相比,預(yù)先感染日本血吸蟲(chóng)尾蚴顯著減輕小鼠關(guān)節(jié)炎的病情,降低關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率,改善病理?yè)p害;血清中膠原特異性IgG、IgG2a顯著降低,IgG1水平升高;脾淋巴細(xì)胞應(yīng)對(duì)多克隆及抗原特異性刺激誘發(fā)的增殖反應(yīng)明顯降低;日本血吸蟲(chóng)感染顯著抑制CIA小鼠IFN-γ+

6、CD4+T細(xì)胞比例,提高IL-4+CD4+T細(xì)胞百分比。僅在雙性感染的CIA鼠發(fā)現(xiàn)CD25highCD4+Treg(regulatory T cells,Treg)的增殖及IL-17+CD4+T細(xì)胞的抑制。血吸蟲(chóng)感染顯著降低了脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中INF-γ、TNF-α、IL-1β和IL-6的表達(dá)水平,提高IL-10表達(dá)。此外,血吸蟲(chóng)感染顯著上調(diào)炎癥關(guān)節(jié)內(nèi)部炎癥因子及NF-κB配體-受體活化因子(receptor activator of N

7、F-κB ligand,RANKL)的表達(dá)。對(duì)于已經(jīng)建立的感染模型并出現(xiàn)明顯臨床癥狀的CIA小鼠,感染血吸蟲(chóng)尾蚴不僅不能改善病情,反而加重病情。
　　結(jié)論:
　　日本血吸蟲(chóng)預(yù)先感染誘導(dǎo)的Th2優(yōu)勢(shì)應(yīng)答可顯著抑制CIA異常的Th1應(yīng)答,減少炎癥介質(zhì)的釋放,減輕病情,改善病理?yè)p害;雙性感染還可上調(diào)Treg,抑制CIA小鼠過(guò)度的Th17應(yīng)答。血吸蟲(chóng)感染對(duì)CIA的保護(hù)作用依賴于Th2優(yōu)勢(shì)應(yīng)答的預(yù)先建立,使異種Ⅱ型膠原不能有效啟動(dòng)致病