滑膜p53基因表達(dá)對(duì)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎Th17、Treg及Th1-Th2細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、背景：類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種病因不明的以慢性破壞性關(guān)節(jié)病變?yōu)樘卣鞯娜碜陨砻庖咝约膊?，以雙手、腕、膝、踝和足關(guān)節(jié)的對(duì)稱(chēng)性多關(guān)節(jié)受累為主，我國(guó)的患病率大約為0.32％~～0.36％。病理上表現(xiàn)為關(guān)節(jié)滑膜的慢性炎癥、增生形成血管翳，侵犯關(guān)節(jié)軟骨、軟骨下骨、韌帶和肌腱等，造成患者關(guān)節(jié)軟骨、骨和關(guān)節(jié)囊的破壞，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失，甚至還會(huì)造成機(jī)體其他器官，如肺、心臟、眼、腎臟等內(nèi)臟的病變。

2、 在本實(shí)驗(yàn)室的前期工作中，我們已經(jīng)熟練掌握了人滑膜成纖維細(xì)胞(Fibroblast-like synoviocytes，F(xiàn)LS)的原代培養(yǎng)，摸索并確定了通過(guò)電轉(zhuǎn)染的方法將人FLS的p53基因表達(dá)進(jìn)行干擾的最佳條件[1]。 目的：本研究工作將經(jīng)過(guò)p53 siRNA(small interfering RNA)干擾處理后的人FLS和RA患者的外周靜脈血中的CD4+T淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)，檢測(cè)FLS經(jīng)干擾后的相應(yīng)生物學(xué)變化和其對(duì)CD4

3、+T淋巴細(xì)胞亞群Th17、Treg、Th1及Th2的影響，初步探討RA的病因及病理生理變化。 本論文工作主要研究?jī)?nèi)容包括兩部分： (一)FLS內(nèi)p53表達(dá)干擾后對(duì)共培養(yǎng)的CD4+T淋巴細(xì)胞亞群的影響方法：將人FLS內(nèi)p53基因用siRNA技術(shù)干擾后的第三天，利用磁珠篩選技術(shù)得到CD4+T淋巴細(xì)胞，將其與FLS共同培養(yǎng)48h。收集所有細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)CD4+T淋巴細(xì)胞亞群Th1

4、7、Treg、Th1及Th2四大成分的改變。用RT-PCR(Reverse transcription-Polymerase chain reaction)方法在mRNA水平上對(duì)IFNγ、RORγt、IL17、Foxp3的表達(dá)水平差異進(jìn)行分析。 結(jié)果：人關(guān)節(jié)FLS內(nèi)p53基因被干擾后，會(huì)造成Th1、Th17細(xì)胞在CD4+T淋巴細(xì)胞亞群中百分比含量的增加，而Th2、Treg細(xì)胞沒(méi)有明顯變化。 (二)FLS內(nèi)p53表達(dá)干擾后

5、FLS的生物學(xué)改變方法：將人FLS內(nèi)p53基因用siRNA技術(shù)干擾后第五天，收集細(xì)胞群，提取總RNA，用RT-PCR方法在mRNA水平上研究細(xì)胞因子護(hù)骨素(osteoprotegerin，OPG)表達(dá)水平的差異。并用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(Enzyme-linked immunosorbentassay，ELISA)方法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL6等細(xì)胞因子含量的差異。 結(jié)果：人關(guān)節(jié)FLS內(nèi)p53基因被干擾后，OPG表達(dá)量沒(méi)有明顯變化，而