Myocardin在人子宮肌和子宮肌瘤中的表達(dá)及其與E2的關(guān)系.pdf

1、目的:
　　子宮平滑肌瘤是女性最常見(jiàn)的生殖系統(tǒng)良性腫瘤，其發(fā)病機(jī)制不清。Myocardin是目前已知的最關(guān)鍵的促血管平滑肌細(xì)胞分化因子，Myocardin基因?qū)肽承┓瞧交〖?xì)胞后，可激活一系列平滑肌分化標(biāo)志基因和蛋白的表達(dá)并使其向平滑肌細(xì)胞分化，Myocardin基因缺陷可導(dǎo)致胚胎鼠血管平滑肌細(xì)胞的分化完全被阻斷，這些證據(jù)均顯示Myocardin為祖細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞分化所必需。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)Myocardin在子宮肌瘤發(fā)病中所起作

2、用所知尚少，本研究通過(guò)檢測(cè)Myocardin在正常子宮肌及子宮肌瘤中的表達(dá)，探討其在子宮肌瘤發(fā)病中的作用，為子宮肌瘤的臨床治療及藥物研發(fā)提供新的靶點(diǎn)。
　　方法:
　　1.收集因子宮肌瘤行子宮切除病人的子宮肌及對(duì)應(yīng)的子宮肌瘤組織，每種組織一部分置于Eppendorf管中，于-70℃保存，用于提取組織水平蛋白和RNA，一部分用于原代細(xì)胞培養(yǎng)，檢測(cè)細(xì)胞水平蛋白和RNA。
　　2.采用Western blot蛋白印記方法檢測(cè)

3、兩種組織及原代培養(yǎng)的兩種細(xì)胞中(子宮平滑肌細(xì)胞(HM-SMCs)和子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞(HL-SMCs)Myocardin蛋白的表達(dá)水平。
　　3.設(shè)計(jì)E2濃度及時(shí)間梯度作用以上兩種細(xì)胞，檢測(cè)Myocardin蛋白的表達(dá)情況，探討E2對(duì)Myocardin蛋白表達(dá)的影響。
　　4.采用RT-PCR方法檢測(cè)兩種組織及原代培養(yǎng)的兩種細(xì)胞中Myocardin mRNA的表達(dá)水平，及E2作用后Myocardin mRNA的表達(dá)情況。

4、r>　　5.用雌激素抑制劑ICI處理細(xì)胞后，檢測(cè)子宮平滑肌細(xì)胞的蛋白及mRNA水平Myocardin的表達(dá)變化，從而進(jìn)一步探討E2與Myocardin表達(dá)之間的關(guān)聯(lián)性。
　　結(jié)果:
　　1.與相應(yīng)的正常子宮肌組織相比，Myocardin在子宮肌瘤組織中的表達(dá)降低，同步檢測(cè)的SM22、α-actin等細(xì)胞分化因子的檢測(cè)結(jié)果與之相一致。
　　2.E2能夠促進(jìn)HM-SMCs中Myocardin的表達(dá)，在選取的雌激素濃度梯度下

5、(0.1nM、1nM、10nM、100nM)，HM-SMCs在1nM E2作用下表現(xiàn)出最大的促表達(dá)效應(yīng)。進(jìn)一步選取不同的E2作用時(shí)間，發(fā)現(xiàn)E2作用24h對(duì)Myocardin的表達(dá)表現(xiàn)出明顯的促進(jìn)作用，具有時(shí)間依賴性。
　　3.E2能夠促進(jìn)HL-SMCs中Myocardin的表達(dá)，在選取的雌激素濃度梯度下（0.1nM、1nM、10nM），HM-SMCs在0.1nM E2作用下表現(xiàn)出最大的促表達(dá)效應(yīng)。
　　4.應(yīng)用雌激素受體阻斷

6、劑ICI182780作用HM-SMCs，western blot檢測(cè)Myocardin表達(dá)水平降低，說(shuō)明E2對(duì)HM-SMCs中Myocardin表達(dá)的促進(jìn)作用能夠被其抑制劑阻斷。mRNA水平的檢測(cè)結(jié)果與蛋白相一致。
　　結(jié)論:
　　1.Myocardin在人子宮肌瘤組織中低表達(dá)。這種差異性表達(dá)可能與Myocardin的促分化作用有關(guān)。
　　2.E2可以促進(jìn)人子宮平滑肌細(xì)胞中Myocardin的表達(dá)，1nM E2對(duì)其顯示