桉葉油拮抗維甲酸致畸作用的實驗研究.pdf

1、目的：用桉葉油和維甲酸灌胃SD孕鼠，研究桉葉油對維甲酸致畸形作用的影響。通過檢測胎鼠腦組織中Pax3、Cx43及其mRNA的表達(dá)情況，對其機(jī)理進(jìn)行初步探索。為桉葉油的藥用開發(fā)提供一些實驗依據(jù)。
　　方法：選出SD孕鼠42只，隨機(jī)分為6組，每組7只，溶劑組(花生油+RA)，3個實驗組（桉葉油高、中、低劑量+RA），維甲酸組（RA）和正常組。溶劑對照組用花生油2 ml/只﹒d于孕第7-14 d灌胃，每天一次，孕第10天維甲酸40 mg

2、/kg灌胃一次。桉葉油3個劑量組分別用300 mg/kg﹒d、200 mg/kg﹒d、100 mg/kg﹒d桉葉油于孕第7-14天灌胃，每天一次，孕第10天維甲酸40 mg/kg灌胃一次。RA組用40 mg/kg的維甲酸于孕第10天灌胃一次。正常組為自由飲食。各組于孕21天早上處死孕鼠取胚胎，記錄孕鼠體重，子宮重和胎盤重。計胚胎植入總數(shù)，吸收胎數(shù)、活胎數(shù)、死胎數(shù)。觀察胚胎外形，并測量胎鼠體重、身長、尾長。在孕鼠子宮緊鄰陰道處，左右各獲取

3、1只胎鼠，取其中一只胎鼠腦組織固定，免疫組化技術(shù)檢測胎鼠腦組織的Pax3、Cx43蛋白的表達(dá)。取另一只胎鼠腦組織提取蛋白和RNA，Western Blot、熒光定量PCR檢測腦組織Pax3、Cx43蛋白及其mRNA表達(dá)。剩余活胎用阿利新藍(lán)和茜素紅進(jìn)行骨骼染色，體視鏡下觀測椎骨發(fā)育，脊柱間隙。
　　結(jié)果：
　　1．維甲酸、桉葉油+RA和溶劑+RA對孕鼠的影響各組孕鼠未見明顯的外觀異常，被毛有光澤，活動佳，攝食正常，大便正常。正

4、常對照組、桉葉油+RA各組和溶劑+RA組孕鼠增重、子宮重和胎盤重與RA組比較均無顯著性差異；溶劑+RA組的孕鼠的胎盤重較正常對照組低，比較有顯著性差異。
　　2．桉葉油對維甲酸干擾大鼠胚胎植入及生長發(fā)育的影響外觀無畸形的活胎總體表現(xiàn)為體形完好，膚色紅潤，刺激運(yùn)動反應(yīng)良好。外觀有畸形活胎個體較無外觀畸形胎的體型小，畸形主要表現(xiàn)為腦膜膨出，脊柱裂、眼凸，短尾等。正常對照組的活胎率（97.3±4.6）％，較灌胃維甲酸各組的活胎率高，吸收

5、胎率（2.6±4.6）%，和畸形率（0）較灌胃維甲酸各組的低，死胎率為0；在灌胃維甲酸各組中，桉葉油高（79.6±14.5）%，中（67.6±30.8）%劑量組的活胎率與 RA（58.6±26.6）%組比較有升高的趨勢，但無顯著性差異；畸胎率（44.5±41.6；57.5±35.1）%與 RA（68.1±43.6）%組比較有降低的趨勢，但無顯著性差異。灌胃維甲酸各組的吸收胎率比較無顯著性差異。正常對照組的胎鼠體重、身長、尾長均值明顯高于

6、灌胃維甲酸各組胎鼠的體重、身長、尾長均值；在灌胃維甲酸各組中，桉葉油各組胎鼠體重、身長的均值明顯高于RA組；溶劑對照組胎鼠體重、身長、尾長與RA組比較無顯著性差異；桉葉油各組胎鼠尾長的均值與RA組比較有升高的趨勢，但比較無顯著性差異。
　　3．桉葉油對維甲酸誘發(fā)大鼠胚胎神經(jīng)管畸形的影響灌胃維甲酸各組胎鼠椎骨數(shù)量異常的胎鼠數(shù)與正常對照組比較無顯著性差異，但有椎骨形態(tài)異常數(shù)或者椎骨分裂的胎鼠數(shù)較正常對照組高。在灌胃維甲酸各組中，桉葉油

7、各組椎骨形態(tài)異常數(shù)或者椎骨分裂的胎鼠數(shù)較維甲酸組和溶劑對照組的低。與單純灌胃維甲酸組比較，正常組胎鼠大腦組織的Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表達(dá)較RA組低，在灌胃維甲酸各組中，灌胃桉葉油各組胎鼠腦組織Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表達(dá)較單純灌胃RA組低，且比較有顯著性差異。
　　結(jié)論：
　　1．維甲酸干擾了大鼠胚胎的植入和發(fā)育，桉葉油對維甲酸干擾大鼠胚胎植入有一定的拮抗作用，對維甲酸引起的胎鼠生長發(fā)育遲緩有一定的