全反式維甲酸對(duì)葉酸受體β的調(diào)節(jié)及其作用機(jī)制研究.pdf

1、背景:葉酸受體(folate receptor，F(xiàn)R)是一種介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)化，將葉酸攝取入真核細(xì)胞胞漿的高親和力受體。葉酸受體在腫瘤細(xì)胞的高表達(dá)使其在腫瘤的分子靶向治療中具有廣闊應(yīng)用前景，研究葉酸受體的調(diào)控對(duì)加強(qiáng)其靶向性具有重要意義。 目的:研究全反式維甲酸(all-trans retinoic acid，ATRA)對(duì)KG-1細(xì)胞FR-β表達(dá)的調(diào)節(jié)及其作用機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)： 1．研究ATRA等誘導(dǎo)分化劑對(duì)KG-1等8

2、種瘤細(xì)胞系FR-β蛋白表達(dá)的影響； 2．ATRA等分化劑對(duì)FR-β mRNA的影響； 3．ATRA等分化劑對(duì)葉酸受體基因表達(dá)相關(guān)通路的研究。 方法：用葉酸結(jié)合實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞儀、WesternBlot等方法研究不同濃度ATRA在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)多種瘤細(xì)胞表面FR-β蛋白的影響；通過實(shí)時(shí)定量RT-PER檢測(cè)FR-β mRNA的變化；進(jìn)一步通過不同維甲酸類受體激活劑和抑制劑對(duì)FR-β的影響來研究ATRA影響FR-β表達(dá)的核

3、受體途徑。 結(jié)果： 1、ATRA可誘導(dǎo)KG-1等細(xì)胞系FR-β蛋白的表達(dá)，且在一定范圍內(nèi)呈劑量依賴性(10-9mol/L-10-6mol/L)；但ATRA對(duì)KG-1a，NB4，HL60，293，L1210，JAR，Hela的FR-β蛋白表達(dá)無明顯影響。 2、ATRA在10-6mol/L作用于KG-1細(xì)胞5天可使FR-β mRNA表達(dá)升高，去除ATRA后可使FR-β mRNA表達(dá)下降，呈可逆性。 3、維甲酸

4、受體RARα激活劑CD336、RARγ激活劑CD2781可誘導(dǎo)KG-1細(xì)胞FR-β的表達(dá)，而RARβ和RXRs不能。 結(jié)論： 1、ATRA可上調(diào)KG-1細(xì)胞FR-β表達(dá)，該過程呈可逆性；ATRA誘導(dǎo)KG-1細(xì)胞FR-β蛋白的表達(dá)在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性。 2、ATRA可誘導(dǎo)FR-β mRNA表達(dá)增高。 3、ATRA對(duì)KG-1細(xì)胞FR-β基因的調(diào)節(jié)可能與維甲酸核受體RARα和RARγ有關(guān)，而與RARβ和