microRNA-31在原發(fā)性肺癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf

1、背景和目的：
　　 肺癌是世界上發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤。據(jù)2000年資料統(tǒng)計(jì)，全球約有1100000例患者因此病而死亡。并且其發(fā)病人數(shù)呈逐年遞增的趨勢(shì)。然而由于其早期癥狀不明顯，又缺乏敏感的篩查指標(biāo)及有效的早期診斷方法，致使大多數(shù)肺癌患者確診時(shí)已到了疾病的晚期，錯(cuò)過(guò)了接受最佳治療的時(shí)機(jī)，只能進(jìn)行姑息性治療。因此其5年生存率也只有15％左右，成為人類(lèi)因腫瘤所致死亡率最高的疾病。
　　 microRNA(miRNA)指

2、長(zhǎng)度約21-25nt、非編碼、單鏈小型的RNA，能夠識(shí)別特定的靶mRNA，在轉(zhuǎn)錄后水平通過(guò)促進(jìn)靶mRNA的降解和／或抑制其翻譯過(guò)程而發(fā)揮負(fù)調(diào)控基因表達(dá)的作用，涉及細(xì)胞的分化、增殖、代謝、耐藥及死亡等多種生物進(jìn)程。并且不同的miRNA具有抑癌基因或癌基因的功能，其異常表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。研究表明，miR-31在肺癌的發(fā)生、發(fā)展中具有重要的作用。因此，對(duì)miR-31在肺癌組織、血清及細(xì)胞中的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，了解其表達(dá)特征以及與肺癌

3、的診斷、腫塊大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、吸煙及分期的關(guān)系，這不僅有助于進(jìn)一步了解肺癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制，并能對(duì)肺癌的早期篩查、早期診斷提供指導(dǎo)。
　　 材料與方法：
　　 1、材料來(lái)源：
　　 64對(duì)肺癌組織及癌旁正常組織標(biāo)本、74例手術(shù)患者血清標(biāo)本、73例Ⅳ期肺癌患者血清標(biāo)本均取自河南省腫瘤醫(yī)院2008.12～2010.9進(jìn)行手術(shù)或化療的肺癌患者。114例正常對(duì)照血清標(biāo)本取自2010.4-2010.9在河南省腫瘤醫(yī)院、河南

4、省人民醫(yī)院、河南大學(xué)附屬淮河醫(yī)院進(jìn)行體檢的正常人群。人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞株95D由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究國(guó)家分子腫瘤學(xué)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室建立，人非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)細(xì)胞株A549及耐藥細(xì)胞株A549由鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院臨床藥理研究所惠贈(zèng)。
　　 按照WHO標(biāo)準(zhǔn)(2004版)進(jìn)行組織學(xué)分類(lèi)及UICC（2009年第7版）標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行TNM分期。
　　 2、實(shí)驗(yàn)方法：
　　 采用Trizol法提取組織、血清、細(xì)胞中的總RNA

5、，并對(duì)miRNA進(jìn)行PolyA加尾、反轉(zhuǎn)錄。采用熒光real-timePCR方法對(duì)miR-31的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。
　　 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。所有數(shù)據(jù)比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)果：
　　 1、miR-31在組織中的表達(dá)情況
　　 miR-31在64例肺癌患者癌組織中的表達(dá)量均高于癌旁正常組織，為癌旁正常組織的5.89倍，P＜O

6、.OO1;在Ⅰ期、Ⅱ期早期患者中，miR-31在癌組織中的表達(dá)量也高于正常組織，P值分別為0.002、0.005;在腫塊長(zhǎng)徑＞3cm組的表達(dá)量為腫塊長(zhǎng)徑≤3cm組的3.17倍，P=0.045。無(wú)論淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與否，miR-31的表達(dá)量沒(méi)有明顯差異，P=0.703。在Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期中的表達(dá)存在差異，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P=0.413。
　　 2、miR-31在血清中的表達(dá)情況
　　 在Ⅰ-Ⅳ期的肺癌患者血清中，miR-31的表

7、達(dá)量為正常對(duì)照的7.66倍，P＜0.001;在Ⅰ期、Ⅱ期早期患者中，miR-31在肺癌患者血清中的表達(dá)量也高于正常對(duì)照血清，P值分別為0.03、＜0.001。在手術(shù)肺癌患者血液中，腫塊長(zhǎng)徑＞3cm組患者血液中miR-31的表達(dá)量明顯高于腫塊長(zhǎng)徑≤3cm組，P=0.027;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性組與陰性組之間相比，P=0.245。并且與有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)，P=0.268。
　　 3、miR-31在細(xì)胞中的表達(dá)情況
　　 在人高轉(zhuǎn)移肺

8、癌細(xì)胞株95D、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549及耐藥A549細(xì)胞中，miR-31的相對(duì)表達(dá)量分別為0.043、0.072、0.131。
　　 4、miR-31的表達(dá)與吸煙的關(guān)系
　　 在組織標(biāo)本中，45例吸煙患者與19例非吸煙患者相比，吸煙患者組織中miR-31的表達(dá)量為非吸煙患者的3.06倍，P=0.033。
　　 5、miR-31的表達(dá)與手術(shù)的關(guān)系
　　 在74例行手術(shù)治療的患者中，術(shù)后miR-31在血

9、清中的表達(dá)量為術(shù)前的1.45倍，P=0.772。在腺癌、鱗癌、小細(xì)胞癌中，術(shù)前與術(shù)后相比無(wú)明顯差異，P值分別為0.18、0.488、0.776。
　　 結(jié)論：
　　 1、血清中miR-31可能作為肺癌的生物標(biāo)志物，在早期篩查及早期診斷方面具有一定的價(jià)值。
　　 2、miR-31可能參與肺癌的發(fā)生、發(fā)展，并可能與肺癌腫塊的大小相關(guān)。
　　 3、miR-31可能不促進(jìn)肺癌的轉(zhuǎn)移。
　　 4、miR-3