miR-202在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及臨床意義初步研究.pdf

1、背景:肝細(xì)胞癌是一種常見的高惡性程度的消化系統(tǒng)腫瘤，死亡率居全球第三。肝癌早期診斷水平與其預(yù)后息息相關(guān)，但由于其早期發(fā)現(xiàn)困難，確診多屬腫瘤晚期，導(dǎo)致傳統(tǒng)放化療及手術(shù)治療效果不佳。目前肝癌診斷主要依靠血清AFP水平，但其敏感性及特異性不甚理想，因此尋找新的無創(chuàng)生物標(biāo)記物尤為重要。大量研究發(fā)現(xiàn)miRNAs與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，且具有很強(qiáng)的細(xì)胞、組織特異性，可作為潛在的診斷標(biāo)志物。miRNA是一類小分子非編碼RNA，因其靶基因眾多、調(diào)控機(jī)

2、制復(fù)雜成為近來研究熱點(diǎn)。研究表明肝癌中存在許多信號(hào)通路的異常激活，例如Notch、Wnt及Hedgehog（Hh）通路等。其中Hh通路是一條在胚胎發(fā)育時(shí)期調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)與分化的高度保守的形態(tài)發(fā)生通路，其異常激活與肝癌的發(fā)生、發(fā)展緊密相關(guān)。Gli1(Glioma-associated Oncogene Homolog1，Gli1)基因是Hh通路的核轉(zhuǎn)錄因子，其激活直接導(dǎo)致Hh信號(hào)通路下游目的基因轉(zhuǎn)錄水平的改變。已有文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)iRNA可以靶向

3、抑制Hh信號(hào)通路因子參與Hh信號(hào)通路的活化，兩者協(xié)同調(diào)控腫瘤的發(fā)生、發(fā)展進(jìn)程。在眾多靶向調(diào)控Gli1基因的肝癌相關(guān)miRNAs中，miR-202在肝癌組織中的表達(dá)水平僅被報(bào)道一次，迄今尚無文獻(xiàn)報(bào)道m(xù)iR-202在肝癌血清中的表達(dá)水平及其與肝癌患者臨床病理特征之間的聯(lián)系，以及在肝癌發(fā)生、發(fā)展過程中與Hh通路之間的相互作用。本研究通過檢測(cè)miR-202在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)水平，分析其在肝癌中的臨床意義及潛在診斷價(jià)值，進(jìn)一步探討Hh通路在肝癌

4、中的的協(xié)同調(diào)控機(jī)制。
　　目的:檢測(cè)miR-202在肝癌細(xì)胞、FFPE組織及血清中的表達(dá)情況，分析miR-202表達(dá)量與肝癌臨床病理參數(shù)之間的聯(lián)系，評(píng)價(jià)miR-202作為特異性生物標(biāo)志物對(duì)肝癌的潛在診斷價(jià)值，初步探討miR-202與Hedgehog通路在肝癌中的作用，為進(jìn)一步深入了解肝癌發(fā)病的分子機(jī)制提供依據(jù)。
　　方法:采用Real-time RT-PCR方法，分別以LO2細(xì)胞株、正常肝臟FFPE組織及健康志愿者血清作為對(duì)

5、照，以U6為內(nèi)參，檢測(cè)miR-202在肝癌細(xì)胞株、FFPE組織及血清標(biāo)本中的中的表達(dá)情況，分析其與肝癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，并利用SPSS21.0軟件繪制miR-202、AFP及兩者聯(lián)合對(duì)肝癌的診斷ROC曲線，評(píng)價(jià)miR-202對(duì)肝癌的潛在診斷價(jià)值;以正常肝臟FFPE組織作為對(duì)照，以GADPH基因作為內(nèi)參，檢測(cè)Gli1基因在肝癌中的表達(dá)水平，采用SPSS軟件分析其與miR-202表達(dá)水平之間的相關(guān)性，為進(jìn)一步深入探討肝癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制

6、提供初步依據(jù)。其中3株肝癌細(xì)胞株和LO2細(xì)胞為重慶醫(yī)科大學(xué)臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室惠贈(zèng)，70例肝癌FFPE組織及血清標(biāo)本來自四川醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院2013年07月-2014年09月診治的70例原發(fā)性肝癌患者。
　　結(jié)果:1.miR-202在肝癌細(xì)胞株中的表達(dá)較人正常肝細(xì)胞系LO2的表達(dá)均顯著降低(P＜0.05)，miR-202在肝癌癌細(xì)胞株HepG2的表達(dá)量最低（0.0394±0.0141），顯著低于LO2細(xì)胞株(P＜

7、0.05);肝癌FFPE組織及血清miR-202表達(dá)量均較正常對(duì)照顯著降低（P＜0.05）。2.肝癌FFPE中miR-202的低表達(dá)和肝癌患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤最大徑、臨床分期、局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和AFP濃度等腫瘤臨床特征無關(guān)(P＞0.05);肝癌血清miR-202表達(dá)量?jī)H與腫瘤數(shù)目有關(guān)(P＜0.05);miR-202在同一患者肝癌血清中的表達(dá)量（0.33±0.30）顯著低于肝癌組織標(biāo)本中表達(dá)量（0.51±0.26）(P

8、＜0.05)。3.miR-202和AFP腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)可獲得較高的敏感度(81.8％)和特異度(93.0％)，曲線下面積最大(0.942)，并獲得高于單一miR-202或者AFP的特異性、Youden指數(shù)、陽性似然比/陰性似然比。4.Gli1基因在肝癌組織中的表達(dá)水平（3.45±2.07）相較于正常肝臟組織（1.34±0.58）明顯升高，兩組之間差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，在肝癌FFPE組織中，miR-202表達(dá)水平與Gli

9、1基因表達(dá)水平存在一定相關(guān)性（r=0.583，P＜0.005）。
　　結(jié)論:1.miR-202在肝癌發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)作用，其表達(dá)下調(diào)可能是肝癌發(fā)生的早期事件，且在肝癌中表達(dá)穩(wěn)定。2.miR-202聯(lián)合AFP對(duì)肝癌診斷價(jià)值優(yōu)于單一AFP，提示miR-202與AFP的聯(lián)合診斷價(jià)值大于單獨(dú)指標(biāo)的診斷價(jià)值。3.Hh通路中的核轉(zhuǎn)錄因子Gli1在肝癌中可能發(fā)揮一定作用，Gli1基因與miR-202可能在肝癌中的表達(dá)水平存在