腹脂素對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1和單核細(xì)胞MCP-1以及CD36表達(dá)的影響.pdf

1、第一章腹脂素對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1表達(dá)的影響 背景：腹脂素是一種新發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞因子，在肥胖、糖尿病以及高血壓患者體內(nèi)有顯著升高。體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)腹脂素能促進(jìn)單核細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌TNF-a、IL-1β和IL-6等炎癥因子；腹脂素也能促進(jìn)單核細(xì)胞表達(dá)ICAM-1和促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)VEGF。而脂肪細(xì)胞和單核細(xì)胞也能分泌表達(dá)腹脂素。腹脂素在頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊和冠脈斑塊上表達(dá)豐富，且有缺血性癥狀者的腹脂素水平高于無癥狀者，這些提

2、示腹脂素很可能和動(dòng)脈粥樣硬化病變發(fā)展有關(guān)。腹脂素能通過激活內(nèi)皮ERK(1/2)信號(hào)途徑促進(jìn)細(xì)胞表達(dá)VEGF,而既往有研究發(fā)現(xiàn)激活內(nèi)皮細(xì)胞ERK(1/2)能促進(jìn)粘附分子ICAM-1的表達(dá)。內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1表達(dá)增加會(huì)促進(jìn)單核細(xì)胞粘附于內(nèi)皮加速動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展。我們推測(cè)腹脂素可能通過激活內(nèi)皮細(xì)胞的ERK(1/2)信號(hào)通路促進(jìn)粘附分子ICAM-1的表達(dá)而影響動(dòng)脈粥樣硬化病變的進(jìn)展。 目的：觀察腹脂素單獨(dú)或者協(xié)同ox-LDL、葡萄糖對(duì)

3、內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)ICAM-1以及對(duì)內(nèi)皮-單核細(xì)胞粘附的影響。 方法：采用HUVEC內(nèi)皮細(xì)胞株傳代3-6代時(shí)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞作為研究對(duì)象。通過檢測(cè)細(xì)胞ICAM-1mRNA和蛋白表達(dá)變化來觀察腹脂素、腹脂素+ox-LDL或者腹脂素+葡萄糖對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1表達(dá)的影響，以及ERK(1/2)信號(hào)途徑在腹脂素影響內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)ICAM-1中的作用。 結(jié)果： 1.腹脂素能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)ICAM-1，且其水平越高(觀察濃度

4、100ng/ml～800ng/ml)，刺激內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)ICAM-1的作用越強(qiáng)，腹脂素也促進(jìn)了細(xì)胞ERK(1/2)的表達(dá)，ERK(1/2)抑制劑PD98059能顯著抑制ICAM-1的表達(dá)。 2.腹脂素和ox-LDL有協(xié)同刺激內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)ICAM-1的作用，且腹脂素水平越高(觀察濃度100ng/ml～800ng/ml)，協(xié)同刺激內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)ICAM-1的作用越強(qiáng)，腹脂素和ox-LDL也促進(jìn)了細(xì)胞EPK(1/2)的表達(dá)，ERR(1/2

5、)抑制劑PD98059能顯著抑制ICAM-1的表達(dá)。 3.腹脂素和葡萄糖有協(xié)同刺激內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)ICAM-1的作用，且腹脂素水平越高(觀察濃度100ng/ml～800ng/ml)，協(xié)同刺激內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)ICAM-1的作用越強(qiáng)，腹脂素和高糖也促進(jìn)了細(xì)胞ERIC(1/2)的表達(dá)，ERK(1/2)抑制劑PD98059能顯著抑制ICAM-1的表達(dá)。 4.腹脂素促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)ICAM-1的同時(shí)，也增強(qiáng)了單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的粘附能力。

6、 結(jié)論：腹脂素有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)ICAM-1的作用，在ox-LDL或者葡萄糖促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)ICAM-1的基礎(chǔ)上腹脂素能進(jìn)一步促進(jìn)ICAM-1表達(dá)，腹脂素促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)ICAM-1和其激活細(xì)胞ERK(1/2)信號(hào)通路有關(guān)。腹脂素促進(jìn)細(xì)胞ICAM-1表達(dá)增加的同時(shí)也促進(jìn)了單核細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的粘附。 第二章腹脂素對(duì)單核細(xì)胞MCP-1表達(dá)的影響 背景：在動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)展過程中，單核細(xì)胞表達(dá)MCP-1增加及隨后的

7、單核細(xì)胞向內(nèi)皮下趨化遷移增多是促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的重要因素。腹脂素是一種新發(fā)現(xiàn)的脂肪細(xì)胞因子，在和動(dòng)脈粥樣硬化病變密切相關(guān)的肥胖、糖尿病以及高血壓患者體內(nèi)有顯著升高。已有研究發(fā)現(xiàn)腹脂素有促進(jìn)單核細(xì)胞表達(dá)ICAM-1、內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)VEGF的作用。腹脂素在頸動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化斑塊和冠脈斑塊上有顯著表達(dá)，且有癥狀的頸動(dòng)脈粥樣硬化患者腹脂素水平顯著高于無癥狀者，這些提示腹脂素很可能和動(dòng)脈粥樣硬化 病變發(fā)展有關(guān)。單核細(xì)胞MCP-1的表達(dá)能促進(jìn)粘

8、附于內(nèi)皮細(xì)胞上的單核細(xì)胞向內(nèi)皮下趨化遷移，腹脂素對(duì)單核細(xì)胞趨化因子MCP-1表達(dá)的影響尚無研究。 目的：觀察腹脂素單獨(dú)或者協(xié)同ox-LDL、葡萄糖對(duì)單核細(xì)胞表達(dá)MCP-1的影響，以及p38MAPK信號(hào)通道在腹脂素影響MCP-1表達(dá)中的作用。 方法：采用THP-1單核細(xì)胞株傳代3-6代時(shí)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞作為研究對(duì)象。通過檢測(cè)細(xì)胞MCP-1mRNA和蛋白來觀察腹脂素、腹脂素+ox-LDL或者腹脂素+葡萄糖對(duì)單核細(xì)胞MCP

9、-1表達(dá)的影響，以及p38 MAPK信號(hào)途徑在腹脂素影響單核細(xì)胞表達(dá)MCP-1中的作用。結(jié)果 1.腹脂素能促進(jìn)單核細(xì)胞表達(dá)MCP-1，且其水平越高(觀察濃度100ng/ml～800ng/ml)，刺激單核細(xì)胞表達(dá)MCP-1的作用越強(qiáng)，p38抑制劑SB202190能顯著抑制腹脂素促進(jìn)單核細(xì)胞表達(dá)MCP-1的作用。 2.腹脂素+ox-LDL有協(xié)同刺激單核細(xì)胞表達(dá)MCP-1的作用，腹脂素水平越高，其協(xié)同刺激單核細(xì)胞表達(dá)

10、MCP-1的作用越強(qiáng)，p38抑制劑SB202190能顯著抑制腹脂素促進(jìn)單核細(xì)胞表達(dá)MCP-1的作用。 3.腹脂素+葡萄糖有協(xié)同刺激單核細(xì)胞表達(dá)MCP-1的作用，腹脂素水平越高，其協(xié)同刺激單核細(xì)胞表達(dá)MCP-1的作用越強(qiáng)，p38抑制劑SB202190能顯著抑制腹脂素促進(jìn)單核細(xì)胞表達(dá)MCP-1的作用。 結(jié)論：腹脂素有促進(jìn)單核細(xì)胞表達(dá)MCP-1的作用，在ox-LDL或者葡萄糖促進(jìn)單核細(xì)胞表達(dá)MCP-1的基礎(chǔ)上腹脂素能進(jìn)一步促進(jìn)

11、MCP-1表達(dá)，腹脂素促進(jìn)單核細(xì)胞表達(dá)MCP-1和其激活細(xì)胞p38MAPK信號(hào)通路有關(guān)。 第三章腹脂素對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞CD36表達(dá)的影響 背景：動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)展過程中，遷移到內(nèi)皮下的單核細(xì)胞轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞后其表面清道夫受體CD36表達(dá)增加并促進(jìn)細(xì)胞攝取ox-LDL和高級(jí)糖基化終末產(chǎn)物，從而促進(jìn)巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞，加速動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展。在巨噬細(xì)胞CD36表達(dá)的過程中PPARγ信號(hào)途徑激活起著重要作用。腹脂素

12、在頸動(dòng)脈斑塊和冠脈斑塊上表達(dá)豐富，且有腦缺血癥狀的頸動(dòng)脈粥樣硬化患者腹脂素水平顯著高于無癥狀者，提示腹脂素很可能和動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)展有關(guān)。腹脂素是否通過改變單核.巨噬細(xì)胞清道夫受體CD36的表達(dá)影響動(dòng)脈粥樣硬化病變進(jìn)展尚不清楚。 目的：觀察腹脂素單獨(dú)或者協(xié)同ox-LDL、葡萄糖對(duì)單核-巨噬細(xì)胞表達(dá)清道夫受體CD36表達(dá)和細(xì)胞對(duì)膽固醇攝取的影響。 方法：將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的THP-1單核細(xì)胞予佛波酯誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞后作

13、為研究對(duì)象。通過RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞CD36和PPARγmRNA的表達(dá)水平，用’western-blotting法檢測(cè)細(xì)胞CD36蛋白水平，從核酸和蛋白的水平來觀察腹脂素、腹脂素+ox-LDL或者腹脂素+葡萄糖對(duì)巨噬細(xì)胞CD36表達(dá)的影響，以及PPARγ信號(hào)途徑在腹脂素影響巨噬細(xì)胞表達(dá)CD36中的作用。 結(jié)果： 1.腹脂素能促進(jìn)THP-1巨噬細(xì)胞表達(dá)CD36和PPARγ，且其水平越高(觀察濃度100ng/ml～800n

14、g/ml)，刺激THP-1巨噬細(xì)胞表達(dá)CD36和PPARγ的作用越強(qiáng)，PPARγ抑制劑GW9662能顯著抑制腹脂素促進(jìn)THP-1巨噬細(xì)胞表達(dá)CD36的作用。 2.腹脂素+ox-LDL有協(xié)同刺激THP-1巨噬細(xì)胞表達(dá)CD36和PPARγ的作用，腹脂素水平越高，其協(xié)同刺激THP-1巨噬細(xì)胞表達(dá)CD36和PPARγ的作用越強(qiáng)，細(xì)胞吞噬的脂質(zhì)量越多，THP-1巨噬細(xì)胞泡沫化現(xiàn)象越顯著，PPARγ抑制劑GW9662能顯著抑制腹脂素和ox-

15、LDL促進(jìn)THP-1巨噬細(xì)胞表達(dá)CD36和吞噬脂質(zhì)的作用。 3.腹脂素+葡萄糖有協(xié)同刺激THP-1巨噬細(xì)胞表達(dá)CD36和PPARγ的作用，腹脂素水平越高，其協(xié)同刺激THP-1巨噬細(xì)胞表達(dá)CD36和PPARγ的作用越強(qiáng)，PPARγ抑制劑GW9662能顯著抑制腹脂素和高糖促進(jìn)THP-1巨噬細(xì)胞表達(dá)CD36的作用。 結(jié)論：腹脂素有促進(jìn)巨噬細(xì)胞表達(dá)CD36的作用，在ox-LDL或者葡萄糖促進(jìn)巨噬細(xì)胞細(xì)胞表達(dá)CD36的基礎(chǔ)上腹脂素