IL-1β介導(dǎo)下人牙周膜細(xì)胞MCP-1表達變化及其對單核細(xì)胞募集影響的研究.pdf

1、趨化因子是介導(dǎo)白細(xì)胞在組織中定向遷移的一類重要生物活性因子。趨化因子家族中單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-1)主要通過趨化單核細(xì)胞向炎癥部位定向遷移,參與機體多種免疫及炎癥反應(yīng)過程。目前研究顯示,正畸所致炎性牙根吸收(OIIRR)過程中有大量單核細(xì)胞的募集現(xiàn)象,但這些外周血來源的單核細(xì)胞向炎癥牙周部位募集的生物學(xué)機制還不清楚。最近有研究發(fā)現(xiàn),在牙根吸收過程中牙周膜細(xì)胞中MCP-1表達顯著增高,提示牙周膜細(xì)胞中MCP-1的高表達可能與局部炎

2、癥牙周組織中單核細(xì)胞的募集相關(guān)。
　　白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)是一種重要的促炎因子,在牙根吸收過程中,一方面IL-1β可以促進破骨細(xì)胞的形成,調(diào)節(jié)破牙骨質(zhì)細(xì)胞的功能;另一方面IL-1β可以促進牙周膜細(xì)胞中多種與牙根吸收相關(guān)的細(xì)胞因子分泌增加。那么,IL-1β能否上調(diào)人牙周膜細(xì)胞(hPDLCs)中MCP-1的表達,并通過MCP-1的趨化功能促進單核細(xì)胞的募集呢?
　　針對上述關(guān)于單核細(xì)胞向牙周組織募集機制的問題,本研究通

3、過體外實驗的方法,觀察了炎性因子IL-1β對hPDLCs中MCP-1表達的影響,并進一步研究了IL-1β介導(dǎo)下hPDLCs分泌MCP-1對THP-1單核細(xì)胞趨化作用的影響,以初步分析和探討炎性因子IL-1β作用下,單核細(xì)胞向局部牙周組織中募集的分子機制。
　　方法:
　　1.IL-1β對hPDLCs細(xì)胞中MCP-1表達影響的研究
　　hPDLCs分別與不同濃度IL-1β(0、1、5、10、25ng/ml)共孵育24h后

4、,用RT-PCR方法、免疫熒光染色及westernblot方法檢測hPDLCs中MCP-1的mRNA及蛋白表達;hPDLCs與10ng/ml的IL-1β孵育不同時間點(12、24、48、72h)后,用RT-PCR方法及westernblot方法檢測hPDLCs中MCP-1的mRNA及蛋白表達。
　　2.IL-1β介導(dǎo)下hPDLCs細(xì)胞MCP-1表達增強對THP-1細(xì)胞募集作用影響的研究
　　hPDLCs分別與不同濃度IL-1

5、β(0、1、5、10、25ng/ml)共孵育24h后,收集細(xì)胞上清液,應(yīng)用Transwell小室觀察不同濃度IL-1β作用hPDLCs后,其細(xì)胞上清液對THP-1細(xì)胞的趨化效應(yīng)。
　　hPDLCs與IL-1β(0、10ng/ml)共孵育24h后,收集細(xì)胞上清液,將其隨機分為實驗組與對照組;實驗組hPDLCs上清液再經(jīng)MCP-1中和抗體處理,對照組hPDLCs上清液不經(jīng)MCP-1中和抗體處理,應(yīng)用Transwell小室觀察兩組細(xì)胞上

6、清液對THP-1細(xì)胞趨化作用的影響。
　　結(jié)果:
　　1.IL-1β對hPDLCs細(xì)胞中MCP-1表達影響的研究結(jié)果:
　　RT-PCR結(jié)果顯示,正常hPDLCs中可見MCP-1mRNA弱表達;低濃度IL-1β(1ng/ml及5ng/ml)對hPDLCs中MCP-1mRNA表達作用不明顯(P>0.05);而高濃度的IL-1β(10ng/ml及25ng/ml)作用下,可以上調(diào)hPDLCs中MCP-1mRNA表達(P<0.

7、05);10ng/mlIL-1β作用hPDLCs24h后,與最初的12h相比可增強MCP-1mRNA表達(P<0.05),但這種增強效應(yīng)在繼續(xù)作用48h及72h以后,與24h組相比并未發(fā)生明顯改變。
　　免疫熒光染色結(jié)果顯示,正常hPDLCs中MCP-1呈陰性或弱陽性表達;10ng/mlIL-1β作用24h后,hPDLCs中MCP-1呈強陽性表達,且陽性信號主要位于細(xì)胞漿中。
　　Western blot結(jié)果顯示,低濃度IL

8、-1β(1ng/ml及5ng/ml)對hPDLCs中MCP-1蛋白表達作用不明顯(P>0.05);而高濃度的IL-1β(10ng/ml及25ng/ml)作用下,可以上調(diào)hPDLCs中MCP-1蛋白表達(P<0.05);10ng/mlIL-1β作用hPDLCs24h后,可增強MCP-1蛋白表達(P<0.05),但這種增強效應(yīng)在繼續(xù)作用48h及72h以后,與24h組相比并未發(fā)生明顯改變。
　　2.IL-1β介導(dǎo)下hPDLCs細(xì)胞MCP

9、-1表達增強對THP-1細(xì)胞募集作用的研究結(jié)果:
　　細(xì)胞遷移實驗結(jié)果顯示,IL-1b單獨作用對THP-1細(xì)胞無趨化作用;當(dāng)不同濃度IL-1b作用hPDLCs后,其上清液可以明顯增強對THP-1細(xì)胞的趨化效應(yīng)(P<0.05),而MCP-1抗體可顯著抑制這種趨化作用(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　本研究結(jié)果顯示,IL-1β作用下,hPDLCs中MCP-1表達增高;IL-1β通過上調(diào)hPDLCs中MCP-1的分泌,可以